O-糖翻譯后修飾即O-糖基化修飾，指蛋白質(zhì)合成翻譯過程中在特定氨基酸位點如絲氨酸和蘇氨酸殘基的羧基共價結合O-聚糖的過程。因此，進行O糖基化修飾鑒定的內(nèi)容就包括結合O-聚糖的氨基酸殘基類型以及其在蛋白質(zhì)肽鏈中所處的位置、O-聚糖糖鏈的結構以及含量等。

對于已知的發(fā)生了O-糖基化翻譯后修飾的蛋白質(zhì)，其結合的糖鏈以及可能結合的氨基酸種類是確定的，此時，只需要確定其結合的氨基酸到底是絲氨酸還是蘇氨酸，以及該氨基酸在肽鏈中所處的位置。由于結合了O-糖鏈的氨基酸比沒有連接O-糖鏈的氨基酸在分子質(zhì)量上存在特定的差異，質(zhì)譜技術能檢測這種分子質(zhì)量差異從而實現(xiàn)氨基酸種類的鑒定。通過拼接各肽段可以得到整條蛋白質(zhì)的氨基酸序列，最終確定連接O-糖鏈的氨基酸位點。