?轉(zhuǎn)染?(Transfection): 是借助一定手段人工引入外源核酸?(DNA 或 RNA)?進(jìn)入細(xì)胞的過程。轉(zhuǎn)染目的:?是特異性增強(qiáng)或抑制轉(zhuǎn)染細(xì)胞中外源基因表達(dá)。?

轉(zhuǎn)染的分類?

轉(zhuǎn)染類型: 根據(jù)在宿主細(xì)胞表達(dá)時(shí)間長短，分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染中，外源基因沒有整合到基因組上，僅存在于游離載體，短時(shí)間內(nèi)可獲得基因表達(dá)產(chǎn)物。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染中，外源基因整合到了基因組，可長期穩(wěn)定地獲得目的蛋白。

圖 1.?瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染[1]

咱們淺玩一下 Q&A?(Questions & Answers)?游戲吧，聽說，都答對的小伙伴們新年紅包會拿到手軟哦~

?轉(zhuǎn)染方式：根據(jù)外源核酸進(jìn)入細(xì)胞的方式，轉(zhuǎn)染方式主要有 3 種：化學(xué)方法、物理方法和生物方法。具體特點(diǎn)如下表所示：

由于陽離子聚合物法操作簡單，轉(zhuǎn)染效率高，一般是科研用戶的常客。所以小 M 給大家介紹細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中，陽離子聚合物轉(zhuǎn)染的原理和操作步驟。

陽離子聚合物法?

圖?2.?陽離子聚合物法轉(zhuǎn)染原理[2]?

轉(zhuǎn)染試劑與外源核酸形成陽離子聚合物，胞吞到細(xì)胞，最終導(dǎo)致基因產(chǎn)物“蛋白”的產(chǎn)生

優(yōu)點(diǎn):?與其他方法相比，對多種常用細(xì)胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率；對原代細(xì)胞和難轉(zhuǎn)染細(xì)胞也具有較好的效果；高效低毒、操作簡便、重復(fù)性好。操作步驟1. 使用完全生長培養(yǎng)基將細(xì)胞按照一定細(xì)胞密度，鋪板于 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)皿中，100 μL/well，于 37℃，5% CO2?細(xì)胞培養(yǎng)箱中，過夜貼壁生長；2. 當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 70-90% 時(shí)，吸去原培養(yǎng)基，并加入無菌 PBS 緩沖液洗滌 2 次?(貼壁性較差的細(xì)胞，可省略此步驟)。加入無血清培養(yǎng)基 80 μL/well；3. 96 孔板通常轉(zhuǎn)染 0.25 μg/20 μL/well DNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)染。根據(jù) DNA (μg)：轉(zhuǎn)染試劑 (μL)= 1：3 比例制備轉(zhuǎn)染試劑/ DNA 無血清培養(yǎng)基復(fù)合物，輕輕混勻，室溫靜置 15 min。

具體每孔轉(zhuǎn)染試劑、DNA 及培養(yǎng)基用量如下表所示：

?4. 按照 20 μL/ well 加入試劑- DNA/RNA 混合物，進(jìn)行轉(zhuǎn)染。于 37℃ 5% CO2?細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 24-48 h?(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，可以調(diào)整轉(zhuǎn)染時(shí)間為 24-96 h)；有必要時(shí)在轉(zhuǎn)染 6 h 更換為含血清培養(yǎng)基。5. 使用報(bào)告基因檢測方法或在基因和蛋白水平對轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行檢測。?

圖?2.?轉(zhuǎn)染步驟及轉(zhuǎn)染效率檢測

采用 MCE PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑 (HY-K1014)，將外源基因瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到細(xì)胞。轉(zhuǎn)染 24-48 小時(shí)，通過熒光實(shí)驗(yàn)評價(jià)轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果顯示：在 293T 細(xì)胞中，RFP 陽性細(xì)胞比例高達(dá) 95%；在 BHK-21 細(xì)胞中，與競品公司轉(zhuǎn)染試劑比較，MCE PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑存在明顯優(yōu)勢。?

Tips: 在熒光實(shí)驗(yàn)過程中，可以適當(dāng)加入抗熒光淬滅劑?(HY-K1042)，緩解各種熒光染料的熒光淬滅，輔助轉(zhuǎn)染效率的熒光檢測。

跟著小 M 已經(jīng)了解陽離子聚合物在細(xì)胞轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用，您現(xiàn)在是否也想應(yīng)用在自己的實(shí)驗(yàn)中呢？下面就讓小 M 帶你瀏覽下 MCE 細(xì)胞轉(zhuǎn)染相關(guān)產(chǎn)品吧！

相關(guān)產(chǎn)品

PolyFast Transfection Reagent

是一種以非脂質(zhì)體陽離子聚合物為主要成分的高效轉(zhuǎn)染試劑。

抗熒光淬滅劑

是一種不含熒光探針的封固劑，可用于減緩各種常見熒光染料的熒光淬滅。

MCE 的所有產(chǎn)品僅用作科學(xué)研究或藥證申報(bào)，我們不為任何個(gè)人用途提供產(chǎn)品和服務(wù)

參考文獻(xiàn)

[1]?Kim TK, Eberwine JH. Mammalian cell transfection: the present and the future[J].Anal Bioanal Chem. 2010 , 397(8):3173-8.

?[2]?Fus-Kujawa A, Prus P, Bajdak-Rusinek K, Teper P, Gawron K, Kowalczuk A, Sieron AL.An Overview of Methods and Tools for Transfection of Eukaryotic Cells in vitro[J].Front Bioeng Biotechnol. 2021 , 9:701031.