?為什么把細(xì)胞鋪均勻就那么的難?什么米字法、十字法、螺旋法、還有搖板子要拿起來搖、 或者一定要放在臺子上磨（那種板子與臺子摩擦出來尖銳的聲音...... 最后放進(jìn)孵箱之前,還生怕幾步路搖壞了才鋪好的板子........）五花八門.

不過大多數(shù)技巧其實(shí)并沒有太大的用處，本文總結(jié)最實(shí)用的細(xì)胞鋪板的3種手法技巧，有了這些手法，細(xì)胞鋪均勻不是事兒！

首先，細(xì)胞鋪板不均勻分為三種情況：

1.中間多，周圍少

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2.中間少，四周多

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3.一坨一坨成塊

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到底該怎么拯救呢？

手法一：均勻單層

要鋪成那種很均勻的單層細(xì)胞，手法如下：

1.細(xì)胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基，放入孵箱中放置10-20min。

2.在滴入細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞板子與通風(fēng)櫥有一定的角度，沿著板壁的孔邊緣滴入。

3.滴入后，呈“8”字方法搖晃5-8次。

4.置于水平臺上，放置10-20分鐘

5.放入孵箱。

在細(xì)胞鋪板時(shí)，每一種板子的孔面積有多大，培養(yǎng)的液體量以及加入細(xì)胞量參考下圖.

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手法二：中間少，周圍多

其實(shí)細(xì)胞鋪板不一定都需要單個單個的那么均勻，比如，做免疫熒光時(shí)可以鋪中間少，周圍稍多的板子，同時(shí)檢測到單個細(xì)胞的形態(tài)，另外又可以照一點(diǎn)低倍的用作于統(tǒng)計(jì)，所有的細(xì)胞都在一個環(huán)境中。

特別說明一下：這里的多也只是相對于多，細(xì)胞也是單層的。

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要鋪這樣的細(xì)胞樣子，那鋪細(xì)胞時(shí)要注意手法了：

1.細(xì)胞板子不需要提前用培養(yǎng)基潤洗，直接從邊上滴入混有細(xì)胞的培養(yǎng)基。

2.放置30s-1min后，前后搖晃5-8次。

3.放在水平臺上靜置2-5min。

4.放入孵箱。

手法三：中間多，周圍少

一般在提取蛋白或者提取RNA的時(shí)候有時(shí)會這樣鋪板，因?yàn)橛行┘?xì)胞刮刀不好用，沒有辦法刮到周圍的，想要鋪中間多，周圍少的板子，手法如下：

1.細(xì)胞板子不需要提前潤洗，從中間滴入進(jìn)去后。

2.把板子朝一個方向順時(shí)針或者逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)3-5圈。

3.水平臺上靜置2-5min。

4.放入孵箱。

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想要細(xì)胞鋪板鋪得好，背景知識很重要。在鋪細(xì)胞的時(shí)候，需要準(zhǔn)確的知道所養(yǎng)細(xì)胞的特性，比如：

1.細(xì)胞的名稱，來源。

2.細(xì)胞的屬性。

3.細(xì)胞分裂時(shí)間。

最主要的是要搞清楚細(xì)胞的生長曲線，推斷鋪板后多久可以到達(dá)什么細(xì)胞密度。

細(xì)胞鋪板后，細(xì)胞狀態(tài)不好怎么辦？

建議從以下幾個方面考慮一下原因：

1.用來鋪板的細(xì)胞狀態(tài)本身就不好。

2.用來鋪板的細(xì)胞傳代次數(shù)太多，有些老化。

3.胰酶消化時(shí)間過長。

4.中和的血清量及時(shí)間不夠。

5.支原體污染。

細(xì)胞鋪板是一個經(jīng)驗(yàn)積累的過程，手法也需要積極的改進(jìn)，不要生搬硬套，也不要一味追求絕對的鋪均勻，在實(shí)驗(yàn)過程中多思考細(xì)胞本身的特征和屬性，出現(xiàn)問題積極解決。

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