細胞因子相關(guān)問題,千萬別忽視!
細胞因子(cytokine,CK)是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細胞生成、細胞生長以及損傷組織修復(fù)等多種功能。

細胞因子具有以下作用特點:
多向性和靶向性:一種細胞因子可由多種細胞產(chǎn)生,作用于不同的靶細胞。例如,IL-5既可以來源于Th2細胞,也可以來源于肥大細胞,既能活化B細胞增殖,又能促進嗜酸性粒細胞分化、成熟,
即時性:基本不儲存,隨時產(chǎn)生并發(fā)揮作用。
局部性:通常以自分泌或者旁分泌的形式作用于周圍細胞。
相互協(xié)調(diào):以網(wǎng)絡(luò)形式發(fā)揮作用,不同細胞因子間相互抑制或促進。
多重調(diào)節(jié):發(fā)揮的效應(yīng)與細胞因子濃度、靶細胞類型、其他細胞因子種類以及種屬有關(guān)。
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常見細胞因子的作用:
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由于天然的細胞因子表達量低,分泌具有短時自限性,難以收集提純,一般通過蛋白重組技術(shù)獲得,即先用基因克隆或化學(xué)合成技術(shù)獲得目的基因,連接到適合的表達載體,導(dǎo)入到特定的宿主細胞,利用宿主細胞的遺傳系統(tǒng),表達出有功能的蛋白質(zhì)分子。目前常用的有原核、真核、昆蟲、哺乳動物四種表達系統(tǒng)。

1)細胞因子作為動物免疫抗原進行檢測類抗體的研究,蛋白純度需大于80%;若用于晶體及晶體結(jié)構(gòu)研究,蛋白純度需大于95%;
2)若需選擇不同種屬來源的細胞因子,則要判斷兩種種屬的細胞是否有交叉反應(yīng)活性。一般來說,不同種屬之間蛋白同源性(序列一致性)在80%以上的基本上可確定為有交叉活性;
3)根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇想要的產(chǎn)品時,我們還需要關(guān)注一下內(nèi)毒素的水平,特別是作為細胞添加物使用時。
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許多老師在收到凍干粉之后由于保存或者溶解不當(dāng)造成實驗結(jié)果不理想,小愛也遇到過很多老師詢問,產(chǎn)品室溫保存了兩個月還能用嗎?溶解不了怎么回事?細胞因子儲存和溶解其實都很簡單,愛必信的細胞因子說明書中給了明確標(biāo)注。
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1、收到的凍干粉如何處理?
我們收到的凍干蛋白一般不會立即使用,這種情況下可放置-20℃儲存,室溫一般儲存三周左右,具體時間可參照說明書,請老師們妥善保存收到的產(chǎn)品。
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2、凍干蛋白一般如何溶解?
敲黑板?。?!溶解前,一定要將凍干粉離心收集于離心管底部,不同的凍干蛋白需要的溶解劑不同,比如,abs04698重組人IL4使用中蒸餾水即可溶解, abs04177 IGF-I蛋白需溶解在500mM乙酸中,這是由PH和離子濃度能多種因素決定的,大家一定要仔細閱讀說明書,此外,一定要溶解到說明書推薦的濃度范圍,否則可能會造成不完全溶解或活性減弱。
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3、溶解方式
用槍頭輕輕捶打即可,對于相對較難溶解的,可以在低速搖床上靜止兩小時左右,切不可劇烈震蕩。

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4、溶解后的蛋白如何儲存呢?
重組蛋白溶液一般可在4-7°C下儲存2-7天。避免反復(fù)凍融可將溶液分裝于聚丙烯管中(不會吸附蛋白),在<-20°C下穩(wěn)定保存3個月左右,適當(dāng)加入載體蛋白(BSA、HAS、FBS等)可減少管壁對重組蛋白的吸附損耗。
