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百螢課堂之多重Caspase活性

2023-08-28 13:27 作者:百螢生物  | 我要投稿

? ? ? 半胱氨酸蛋白酶,半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶或半胱氨酸依賴性天冬氨酸定向蛋白酶,是一個(gè)半胱氨酸蛋白酶家族,在細(xì)胞凋亡(細(xì)胞程序性死亡) ,壞死和炎癥中發(fā)揮重要作用。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶在細(xì)胞發(fā)育和成年生命的大多數(shù)其他階段是必不可少的,并且因其在細(xì)胞中的作用而被稱為“劊子手”蛋白質(zhì)。一些半胱天冬酶在免疫系統(tǒng)中也是淋巴細(xì)胞成熟所必需的。細(xì)胞凋亡的失敗是腫瘤發(fā)生和自身免疫性疾病的主要原因之一。也有報(bào)道說,不必要的細(xì)胞凋亡發(fā)生在缺血或阿爾茨海默病。這些新發(fā)現(xiàn)激發(fā)了人們對(duì)半胱天冬酶作為潛在治療靶點(diǎn)的興趣,因?yàn)樗鼈兪窃?0世紀(jì)90年代中期發(fā)現(xiàn)的。

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? ? ? ?Caspase 3/7活性細(xì)胞凋亡測(cè)定試劑盒的目的是通過測(cè)量 Caspase 3活性來監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3被廣泛認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的可靠指標(biāo),因?yàn)榘腚装彼崽於彼岬鞍酌?-3(CPP32/載脂蛋白酶)的激活對(duì)于細(xì)胞凋亡的啟動(dòng)是重要的。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3對(duì)氨基酸測(cè)序天冬氨酸-谷氨酸-谷氨酸-天冬氨酸具有底物選擇性。試劑盒中使用 Z-devD-ProRedTM 作為半胱天冬酶 -3活性的熒光指示劑。通過半胱天冬酶3切割 ProRedTM devD 阻斷肽殘基產(chǎn)生強(qiáng)烈的紅色熒光 ProRedTM,其在約620nm 處熒光測(cè)定,在約530nm 處激發(fā)。


? ? ? Caspase 3/7活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒提供了一個(gè)優(yōu)化的檢測(cè)方案的所有必需成分。該檢測(cè)方法穩(wěn)定可靠,可以很容易地適用于各種熒光平臺(tái)的高通量檢測(cè),如微板檢測(cè)。使用96孔格式的每孔100μL 試劑,該試劑盒提供足夠的試劑進(jìn)行100次測(cè)定。使用384孔格式的每孔25μL 試劑,該試劑盒提供足夠的試劑來執(zhí)行400次測(cè)定。


Cell Meter Caspase3/7活性檢測(cè)試劑盒主要特點(diǎn):

1. 多色功能,可以使用不同顏色的熒光指示劑同時(shí)檢測(cè)不同類型的半胱氨酸活化,如半胱氨酸8、9和10;

2. 穩(wěn)定性好,只需將試劑和細(xì)胞混合后,即可直接讀取結(jié)果,無需細(xì)胞裂解或透化細(xì)胞膜;

3. 方便性高,與常用的濾光片組合兼容。

圖1.檢測(cè) Jurkat 細(xì)胞中 caspase 3/7的活性。在同一天以200,000個(gè)細(xì)胞/孔/90μL 在 Costar 黑色壁/透明底部96孔板中接種 Jurkat 細(xì)胞。用或不用1μM 星形孢素處理細(xì)胞5小時(shí)。加入半胱天冬酶3/7測(cè)定溶液(100μL/孔) ,室溫孵育1小時(shí)。熒光強(qiáng)度在 Ex/Em = 540/620nm 處測(cè)定。
圖2.AMC、 R110和 ProRedTM 在 pH 為7.0的緩沖液中的熒光光譜。AMC,R110和 ProRedTM 半胱天冬酶底物非常適合于多路復(fù)用半胱天冬酶活性。


百螢課堂之多重Caspase活性的評(píng)論 (共 條)

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