昆蟲(chóng)細(xì)胞無(wú)血清懸浮生長(zhǎng)培養(yǎng)基--這種產(chǎn)品是無(wú)血清的、完全懸浮的細(xì)胞培養(yǎng)基，適用于各種細(xì)胞系，支持高密度細(xì)胞生長(zhǎng)。它具有兩倍的時(shí)間、高活力和與廣泛的細(xì)胞類(lèi)型兼容的特點(diǎn)。當(dāng)與Bac到Bac昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)結(jié)合使用時(shí)，它可以在HiFive和SF9昆蟲(chóng)細(xì)胞中高效和穩(wěn)定地表達(dá)多種蛋白質(zhì)。與Bac和SF9細(xì)菌桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)結(jié)合，可以有效和穩(wěn)定地在HiFivea和SF9害蟲(chóng)細(xì)胞中表達(dá)多種蛋白質(zhì)。 ? 艾美捷昆蟲(chóng)細(xì)胞無(wú)血清懸浮生長(zhǎng)培養(yǎng)基基本參數(shù)： 貨號(hào)：A-EXO005 規(guī)格：500mL, 1000mL 保存條件: 4℃避光保存；保質(zhì)期?12?個(gè)月。 ? 昆蟲(chóng)細(xì)胞無(wú)血清懸浮生長(zhǎng)培養(yǎng)基使用方法： 昆蟲(chóng)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境 細(xì)胞培養(yǎng)條件：溫度曲線(xiàn)：27℃±0.5℃、濕度曲線(xiàn)：70%±20%、無(wú)需?CO2、120rpm（振幅：25）。培養(yǎng)過(guò) 程中需注意以下三點(diǎn)： 1） 保證搖床?24?小時(shí)正常運(yùn)轉(zhuǎn)； 2） 防止外界環(huán)境溫度過(guò)高，導(dǎo)致培養(yǎng)箱內(nèi)溫度失控； 3） 防止培養(yǎng)箱內(nèi)水盤(pán)缺水，導(dǎo)致培養(yǎng)箱內(nèi)濕度過(guò)低。 培養(yǎng)基適應(yīng) 1.?直接適應(yīng)：最初培養(yǎng)階段，Hi Five?細(xì)胞按初始密度?0.5×10

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ls/mL?接種，SF9?細(xì)胞按初始密度?1.0×10

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ls/mL?接種，直接將培養(yǎng)基更換為昆蟲(chóng)細(xì)胞無(wú)血清懸浮生長(zhǎng)培養(yǎng)基?(A-EXO005)?進(jìn)行培養(yǎng)。待細(xì)胞培養(yǎng)?2-3代，且生長(zhǎng)穩(wěn)定后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。Hi Five?細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)時(shí)按?0.5×10

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cells/mL?密度接種，SF9?細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)時(shí)按?1.0×10

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cells/mL?密度接種，培養(yǎng)?72h?后均可達(dá)到?5-7×10

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cells/mL，細(xì)胞活率≥90%。 2.?間接適應(yīng)：A-EXO005?培養(yǎng)基與細(xì)胞原培養(yǎng)基?1：1?混合培養(yǎng)細(xì)胞，連續(xù)傳?2-3?代，細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)后可將培 養(yǎng)基更換為?A-EXO005?培養(yǎng)基，再傳?2-3?代，細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。Hi Five?細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)時(shí)按?0.5×10

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?cells/mL?密度接種，SF9?細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)時(shí)按?1.0×10

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cells/mL?密度接種，培養(yǎng)?72h?后均可達(dá)到?5-7×10

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cells/mL，細(xì)胞活率≥90%。 3.?注意事項(xiàng)： 3.1.?根據(jù)細(xì)胞具體情況選擇進(jìn)行培養(yǎng)基直接適應(yīng)或者間接適應(yīng)。 3.2?細(xì)胞馴化初期，若出現(xiàn)密度低、結(jié)團(tuán)等不穩(wěn)定狀態(tài)，根據(jù)密度選擇合適的傳代方式。 a.?稀釋傳代：根據(jù)細(xì)胞密度計(jì)算傳代時(shí)所需細(xì)胞懸液，去除多余細(xì)胞懸液并補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。 b.?離心傳代：根據(jù)細(xì)胞密度計(jì)算傳代時(shí)所需細(xì)胞懸液，800rpm（114g）離心?5min，去除上清，用新鮮 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。 4.?細(xì)胞正常狀態(tài)傳代： 昆蟲(chóng)懸浮細(xì)胞復(fù)蘇： 1.?預(yù)熱培養(yǎng)基：取?20mL?的對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基置于?27℃預(yù)熱，保證預(yù)熱充分。 2.?將凍存管從液氮罐或-80℃冰箱中取出，迅速轉(zhuǎn)移至?37℃水浴中，快速搖晃，直至完全融化。 3.?取預(yù)熱好的培養(yǎng)基?5mL?于無(wú)菌離心管中，并將解凍后的細(xì)胞懸液移入此離心管中。800rpm?離心?5min（除去凍存液中?DMSO）。 4.?離心后棄去上清，用?15mL?預(yù)熱好的培養(yǎng)基（保證較高細(xì)胞密度）重懸細(xì)胞，移至相應(yīng)搖瓶，放于培養(yǎng)箱中 懸浮培養(yǎng)。 昆蟲(chóng)懸浮細(xì)胞傳代： 1. Hi Five?細(xì)胞復(fù)蘇初期傳代： 細(xì)胞復(fù)蘇后前兩代，如果細(xì)胞密度＞2×10

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?cells/mL，取部分細(xì)胞懸液離心傳代，按初始密度?0.8×10

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?cells/mL 接種；如果細(xì)胞密度≤2×10

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?cells/mL，進(jìn)行全部離心換液（細(xì)胞剛復(fù)蘇會(huì)有細(xì)胞碎片，屬正?，F(xiàn)象）。 2. SF9?細(xì)胞復(fù)蘇初期傳代： 復(fù)蘇后?2-3?天取樣計(jì)數(shù)，若細(xì)胞密度＜2×10

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cells/mL?以下，細(xì)胞不做任何處理，繼續(xù)培養(yǎng)?2-3?天（復(fù)蘇后?4-6天），取樣計(jì)數(shù)，若細(xì)胞密度?2-5×10

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cells/mL，直接向搖瓶中加入新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞密度調(diào)整至?1×10

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cells/mL左右，切忌不要離心傳代，繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞密度＞5×10

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cells/mL，可正常稀釋傳代。 3. Hi Five?活細(xì)胞初期傳代： 收到細(xì)胞后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至搖瓶中，取樣計(jì)數(shù)并查看細(xì)胞狀態(tài)，如果細(xì)胞密度＞2×10

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?cells/mL，可以稀釋傳代，按?0.8×10

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?cells/mL?接種；如果細(xì)胞密度≤2×10

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cells/mL，建議全部離心傳代。（細(xì)胞經(jīng)歷運(yùn)輸過(guò)程會(huì)有細(xì)胞碎片，屬正?，F(xiàn)象）。 4. SF9?活細(xì)胞初期傳代： 收到細(xì)胞后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至搖瓶中，取樣計(jì)數(shù)并查看細(xì)胞狀態(tài)，如果細(xì)胞密度≥5×10

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?cells/mL，可以稀釋傳代，按?2×10

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?cells/mL?接種；如果細(xì)胞密度＜5×10

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?cells/mL，繼續(xù)培養(yǎng)?1-4?天，此期間需每?24h?取樣計(jì)數(shù)查看細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞密度≥5×10

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?cells/mL，按?2×10

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?cells/mL?接種，稀釋傳代，直至細(xì)胞恢復(fù)正常狀態(tài)后，按1×10

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cells/mL?接種。（細(xì)胞經(jīng)歷運(yùn)輸過(guò)程會(huì)有細(xì)胞碎片，屬正?，F(xiàn)象）。 昆蟲(chóng)懸浮細(xì)胞凍存： 1.?待細(xì)胞恢復(fù)至正常狀態(tài)后，擴(kuò)大細(xì)胞培養(yǎng)體積準(zhǔn)備凍存建庫(kù)。盡量多建細(xì)胞庫(kù)，保證備份充足。 2.?含血清凍存：選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、活率＞90%細(xì)胞進(jìn)行凍存，凍存細(xì)胞密度：15-20×10

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?cells/mL，推薦20×10

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?cells/mL。 無(wú)血清凍存：選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、活率＞90%細(xì)胞進(jìn)行凍存，凍存細(xì)胞密度：30-40×10

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?cells/mL，推薦40×10

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?cells/mL。 3.?準(zhǔn)備凍存盒：向程序降溫盒注入適量異丙醇，置于?4℃冰箱預(yù)冷。 4.?含血清細(xì)胞凍存液配制：凍存液=40%新鮮培養(yǎng)基+50%FBS（建議使用進(jìn)口胎牛血清）+10%DMSO，凍存液配好后置于?4℃冰箱預(yù)冷。 無(wú)血清細(xì)胞凍存液配制：凍存液=45%新鮮培養(yǎng)基+45%細(xì)胞培養(yǎng)上清+10%DMSO，凍存液配好后置于?4℃冰箱預(yù)冷。 凍存液配制時(shí)，先加培養(yǎng)基再加血清或?DMSO，防止?DMSO?濃度過(guò)高導(dǎo)致血清有效成分變性。 5.?取細(xì)胞懸液，800rpm?離心?5min，棄去上清，用適量細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至目標(biāo)值。 6.?快速分裝細(xì)胞液至凍存管中。 7.?將凍存管放入程序降溫盒中，放于-80℃冰箱，24h?后轉(zhuǎn)至液氮罐中儲(chǔ)存。一段時(shí)間后復(fù)蘇檢測(cè)。 ? 該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。