Chelex100(介紹,提取DNA步驟)
Chelex 100樹脂是一種苯乙烯二乙烯基苯共聚物,含有成對的亞氨基二乙酸酯離子,其在結(jié)合多價金屬離子中充當(dāng)螯合基團。Chelex 100樹脂的羧酸基團將其歸類為弱陽離子交換樹脂,但它與同類中的其他交換劑不同,它具有獨特的高金屬離子選擇性和更高的鍵強度。該樹脂可用于超純化緩沖液和離子試劑:它可以清除金屬污染物,而不會改變非金屬離子的濃度。
Chelex 100螯合離子交換樹脂對銅、鐵和其他重金屬離子的選擇性高于鈉和鉀等一價陽離子。它對二價離子相對于一價離子的選擇性約為 5,000:1,即使在高濃度鹽溶液中,它也對過渡金屬具有很強的吸引力。
??Chelex 100提取DNA的實驗步驟:
將細(xì)胞材料加入1ml TE(1mM EDTA,10mM Tris:pH 8.0)中,并在室溫下孵育10-15分鐘。
將管高速離心以沉淀細(xì)胞材料并除去上清液。
將細(xì)胞物質(zhì)沉淀重懸在5%Chelex 100中,將試管在56°C下孵育15-30分鐘,然后放在沸水浴中放置8分鐘。將試管高速離心2-3分鐘以沉淀沉淀的蛋白質(zhì)。
上清液含有DNA,可直接用于PCR含成對的亞氨基二乙酸根離子的共聚物。該樹脂對多價金屬離子(例如鎂(Mg2 +))具有很高的親和力;它螯合了多價金屬離子,并有效地將其從溶液中去除。
Chelex 100提取DNA過程非常簡單,使用小珠形式提供的Chelex'?100樹脂使用蒸餾水制成5%的懸浮液。將細(xì)胞材料與100懸浮液在56°C孵育30分鐘。此時,通常會添加消化大多數(shù)細(xì)胞蛋白質(zhì)的蛋白酶K。在100°C下溫育8-10分鐘,以確保所有細(xì)胞都破裂并且蛋白質(zhì)變性。然后將試管簡單地離心以將Chelex 100樹脂和變性的蛋白質(zhì)沉淀在試管的底部,剩下含有要用于PCR的DNA的水溶液(圖1)。 Chelex 100懸浮液是堿性的,pH值介于9.0和11.0之間,因此使用此程序分離的DNA是單鏈的。
chelex 100方法提取DNA的主要優(yōu)點是:
快速,耗時約1小時
它很簡單,不涉及液體在試管之間的移動,從而減少了意外混合樣品的可能性
成本很低;并且避免使用有害化學(xué)物質(zhì)
重要的是,它適用于各種法醫(yī)樣品