這種紅色熒光鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物（相當(dāng)于?Alexa Fluor? 594?標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽）選擇性地結(jié)合?F-肌動蛋白。以納摩爾濃度使用，鬼筆環(huán)肽衍生物是用于標(biāo)記、鑒定和?********??透化組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)或無細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的?F-肌動蛋白的便捷探針。鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白絲的結(jié)合比與肌動蛋白單體更緊密地結(jié)合，導(dǎo)致肌動蛋?****??從絲端解離的速率常數(shù)降低，基本上通過防止絲解聚來穩(wěn)定肌動蛋白絲。此外，發(fā)現(xiàn)鬼筆環(huán)肽可抑制?F-肌動蛋白的?ATP?水解活性。鬼筆環(huán)肽在細(xì)胞中的不同濃度下功能不同。當(dāng)以低濃度引?*****??時，鬼筆環(huán)肽?*****??肌動蛋白的聚合程度較低的形式以及細(xì)絲蛋白募集到聚集的肌動蛋白聚合物的穩(wěn)定“島”中，但它不會干擾應(yīng)力纖維，即微絲的粗束。

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鬼筆環(huán)肽的特性是研究?F-肌動蛋白在細(xì)胞中分布的有用工具，方法是用熒光類似物標(biāo)記鬼筆環(huán)肽并使用它們對肌動蛋白絲進(jìn)行染色以進(jìn)行光學(xué)顯微鏡檢查。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已被證明在定位活細(xì)胞或固定細(xì)胞中的肌動蛋白絲以及在體外觀察單個肌動蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)研究的重要工具。

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準(zhǔn)備工作解決方案：

艾美捷鬼筆環(huán)肽-iFluor 594偶聯(lián)物工作溶液

將?1 μL?艾美捷鬼筆環(huán)肽-iFluor 594?偶聯(lián)溶液加入?1 mL?含?1% BSA?的?PBS。

注意：鬼筆環(huán)肽結(jié)合物的儲備溶液應(yīng)分裝并儲存在-20°C。避光。

注意：不同的細(xì)胞類型可能會有不同的染色。應(yīng)??****?制備鬼筆環(huán)肽結(jié)合物工作溶液的濃度。

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艾美捷鬼筆環(huán)肽-iFluor 594偶聯(lián)物示例實(shí)驗(yàn)：

染色細(xì)胞

1.進(jìn)行甲醛固定。將細(xì)胞與?PBS?中的?3.0–4.0%?甲醛在室溫下孵育?10–30?分鐘。

注意：避免使用任?****??甲醇的固定劑?****??甲醇會在固定?****??破壞肌動蛋白。優(yōu)選的固定劑?****??甲醇的甲醛。

2.在?PBS?中沖洗固定細(xì)胞?2-3?次。

3.可選：將?PBS?中的?0.1% Triton X-100?添加到固定細(xì)胞中?3?到?5?分??****?加滲透性。在?PBS?中沖洗細(xì)胞?2-3?次。

4.將?100?μL/孔（96?孔板）的?Phalloidin-iFluor??594 Conjugate?工作溶液加入固定的細(xì)胞中，并在室溫下染色細(xì)胞?20?至?90?分鐘。

5.用?PBS?輕輕沖洗細(xì)胞?2?到?3?次以去除多余的鬼筆環(huán)肽結(jié)合物，然后用?TRITC?或德州紅濾光片組在顯微鏡下進(jìn)行電鍍、密封和成像。

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圖：用?4%?甲醛固定的?HeLa?細(xì)胞的熒光圖像，然后用?Cell Navigator??F-Actin Labeling Kit *Red Fluorescence*?在?Costar?黑色?96?孔板中染色。細(xì)胞分別用?艾美捷鬼筆環(huán)肽-iFluor 594（Cat#23122，紅色）和細(xì)胞核染料?DAPI（Cat#17507，藍(lán)色）標(biāo)記。細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)?(ER)?在固定前用?ER Green?（Cat#22635，綠色）染色。

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