一、技術(shù)簡(jiǎn)介

血管形成（Angiogenesis）是指源于已存在的毛細(xì)血管和毛細(xì)血管后微靜脈新的毛細(xì)血管性血管的生長(zhǎng)。無(wú)論原發(fā)性腫瘤還是繼發(fā)性腫瘤，一旦生長(zhǎng)直徑超過(guò)1-2 mm，都會(huì)有血管生成。這是由于腫瘤細(xì)胞自身可分泌多種生長(zhǎng)因子，誘導(dǎo)血管生成。小管形成實(shí)驗(yàn)是測(cè)量在體外血管生成一種快速的，可量化的方法。

二、實(shí)驗(yàn)耗材

三、實(shí)驗(yàn)步驟

以96孔板為例：

① 每孔加入基質(zhì)膠，避免產(chǎn)生氣泡，迅速轉(zhuǎn)動(dòng)鋪勻；

注意：實(shí)驗(yàn)的96孔板始終置于冰上，基質(zhì)膠插在碎冰內(nèi)。

② 蓋上96孔板蓋子，準(zhǔn)備一張浸過(guò)水的紙巾，制成一個(gè)濕盒；

③ 將96孔板放入濕盒，將濕盒放入培養(yǎng)箱，孵育45分鐘左右，等待膠凝結(jié)；

④ 準(zhǔn)備細(xì)胞懸液：當(dāng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，密度為70%-90%之間時(shí)，將HUVEC細(xì)胞消化下來(lái)，用含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行終止，1200rpm離心，用Deeming人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞密度，充分混勻；

⑤加入細(xì)胞懸液，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要接種對(duì)應(yīng)數(shù)量細(xì)胞，重復(fù)3個(gè)孔；

注意：保持槍頭垂直在孔的上方，不要戳到下邊的凝膠。

⑥ 37℃，CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育，4小時(shí)后可見血管形成。

4.血管形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：以上數(shù)據(jù)為應(yīng)用迪醫(yī)明生物原代細(xì)胞分離技術(shù)以及原代內(nèi)皮培養(yǎng)體系所得P1和P10代數(shù)據(jù)。不同的原代分離技術(shù)與不同的培養(yǎng)基，會(huì)導(dǎo)致較大的結(jié)果差異。