Tubulin porcine brain，T240-DX——微管蛋白（豬腦，?純度>99%）采用Shelanski等人的方法從豬腦中純化出微管蛋白，并用陽離子交換層析進一步純化到99%以上的純度。白色凍干粉供應(yīng)。

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一、Tubulin porcine brain的用途

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主要表現(xiàn)在五個方面：

1.抗微管蛋白配體的IC50和EC50測定；

2.微管結(jié)合研究；

3.微管蛋白單體結(jié)合研究；

4.HDAC6研究；

5.微管激活的運動蛋白atp酶分析。

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二、Tubulin porcine brain的材料組成

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采用Shelanski等人的方法從豬腦中純化出微管蛋白，并用陽離子交換層析進一步純化到99%以上的純度。白色凍干粉供應(yīng)。

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該產(chǎn)品具有完全的聚合活性，采用zhuanli技術(shù)進行凍干以提高穩(wěn)定性和使用壽命。T240在4°C干燥條件下穩(wěn)定1年。如果您的項目需要相同批次的微管蛋白以獲得一致的結(jié)果，強烈建議您批量購買該產(chǎn)品，以節(jié)省時間和金錢。本品可替代我們的高純度牛微管蛋白產(chǎn)品（Cat。#TL238、T238和T237），并以相同的方式工作。

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三、Tubulin porcine brain的純度

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通過SDS-PAGE凝膠上的蛋白質(zhì)掃描密度測定。樣品純度>99%。

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四、Tubulin porcine brain的生物活性

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微管蛋白的一個單位定義為5.0 mg純化蛋白（由精密紅色高級蛋白分析試劑cat測定）。#ADV02）。通過微管蛋白聚合試驗評估T240的生物活性。微管蛋白聚合成微管的能力可以通過觀察340nm處微管蛋白溶液的光密度增加來觀察。當使用分光光度計路徑長度為0.8 cm（1/2面積96孔板中的樣品體積為180μl）時，一般微管蛋白緩沖液中的5 mg/ml微管蛋白溶液加上5%甘油和1 mM GTP，應(yīng)在30分鐘內(nèi)獲得0.75-1.10的OD340 nm讀數(shù)。

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需要注意的是，微管蛋白減去甘油在G-PEM緩沖液中不會聚合，直到微管蛋白濃度非常高（>10 mg/ml）。即使在這些濃度下，聚合也相對緩慢。在低濃度微管蛋白-甘油的情況下，可通過添加聚合促進化合物（例如甘油、紫杉醇或二甲基亞砜）實現(xiàn)高效聚合。

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五、關(guān)于微管蛋白的兩個問題

Q1：儲存微管蛋白以確保zui大的穩(wěn)定性和活性的正確方法是什么？

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A：微管蛋白凍干產(chǎn)品的建議儲存條件為4°C，并添加干燥劑，以保持濕度小于10%的濕度。在這些條件下，蛋白質(zhì)可以穩(wěn)定6個月。凍干蛋白質(zhì)也可以在-70°C下干燥保存，在那里它可以穩(wěn)定6個月。但是，在-70°C時，管蓋上的橡膠密封件可能會破裂并進入濕氣。因此，我們建議在4°C下儲存。如果在-70°C下儲存，如果使用這種儲存條件，則必須在凍干蛋白質(zhì)中加入干燥劑。按照指示重組蛋白質(zhì)后，應(yīng)將G-PEM緩沖液中的濃縮蛋白質(zhì)等份，在液氮中快速冷凍，并在-70°C下儲存（穩(wěn)定6個月）。注：在液氮中快速冷凍微管蛋白是非常重要的，因為其他冷凍方法會導致活性顯著降低。在室溫水浴中快速解凍1分鐘。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

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Q2：為什么細胞骨架推薦使用普通微管蛋白緩沖液和GTP來恢復(fù)微管蛋白？

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A：為了維持微管蛋白和微管蛋白的構(gòu)象，我們推薦使用GTP+tubulin單體。對于再懸浮，我們建議使用普通微管蛋白緩沖液（Cat。#BST01-001），包括80 mM管道，2 mM MgCl2，1 mM EGTA，pH 7.0，補充1 mM GTP（Cat。#BST06-001）。微管蛋白需要GTP和鎂離子來維持適當?shù)姆€(wěn)定性和構(gòu)象，即使是單體狀態(tài)。聚合過程中還需要GTP，因為它在微管蛋白聚合過程中的水解是發(fā)生聚合所必需的。EGTA是鈣的螯合劑，是微管蛋白聚合的有效抑制劑。甘油通常被添加到5-10%的zui終濃度，以增強聚合；然而，甘油不是維持生物活性微管蛋白所必需的，在重組和儲存微管蛋白時也不需要包含甘油。在對重組微管蛋白進行分批儲存時，必須在濃度大于6 mg/ml的液氮中對微管蛋白進行等分和快速冷凍，以保持微管蛋白的生物活性。然后，應(yīng)將等分試樣儲存在-70°C下。解凍等分試樣時，應(yīng)在室溫水浴中快速解凍，并將其放在冰上，直到試驗使用之前。

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http://www.amyjet.com/products/T240-DX.shtml

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