01定義

gDNA：是指有機(jī)體在單倍體狀態(tài)下的DNA全部含量。廣義的基因組也指某一體系中的DNA，它包括編碼或細(xì)胞中固有的核糖體DNA、線粒體DNA、tRNA基因及其它RNA編碼?；蚪M脫氧核糖核酸是染色體DNA，這一概念與染色體外DNA（如質(zhì)粒）相對，常簡寫為gDNA。

02核酸的提取

?核酸的分類

1. DNA：主要存在于細(xì)胞核的染色體中。核外也有少量DNA，如線粒體DNA（mtDNA）,葉綠體DNA（cpDNA），質(zhì)粒DNA。2. RNA：存在于細(xì)胞質(zhì)中，如mRNA，rRNA，tRNA等。

除上述DNA，RNA外，還有非細(xì)胞形式存在的病毒和噬菌體，其或只含DNA,或只含有RNA.

分離純化核酸的原則

?1.?保持核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性。

2.?去除其他雜質(zhì)保證核酸的純度（去除與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)、多糖和脂類等大分子，沉淀不需要的核酸分子）。

核酸純化應(yīng)達(dá)到的要求

1. 核酸樣本中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子；

2. 其他生物大分子的污染應(yīng)降到最低程度；

3. 排除其他核酸分子的污染。

DNA的提取通常遵循三個(gè)基本步驟

1. 裂解宿主細(xì)胞。

2. 將DNA與其他細(xì)胞成分分離。

3. 分離脫氧核糖核酸。

三種方法來從血液中提取基因組DNA

1. 苯酚提取，從水相中抽提變性的蛋白質(zhì)，抑制DNase的降解作用。這種方法非常耗時(shí)，試劑可能有毒并危及健康。

?2.?異丙醇沉淀、非有機(jī)溶劑萃取、甲酰胺裂解物法和玻璃顆粒吸附法，對于從冷凍，痕量和干燥的血液中提取基因組DNA方面無效；

?3.? 非酶鹽析法和微球法，與傳統(tǒng)法相比，這些方法具有成本效益，耗時(shí)更少，并且產(chǎn)生更大量的DNA。

03 gDNA應(yīng)用

構(gòu)建基因組文庫

RFLP分析

DNA是遺傳信息的載體，是分子生物學(xué)研究的主要對象，因此DNA的提取也是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中最重要的操作。

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魏祎?| 文案
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