非靶向代謝組分析
新陳代謝網(wǎng)絡(luò)是十分復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),而人體的代謝網(wǎng)絡(luò)尤為復(fù)雜。現(xiàn)在多數(shù)信號(hào)通路的研究都是集中在代謝網(wǎng)絡(luò)的一個(gè)很小的領(lǐng)域?;蚪M學(xué)、蛋白組學(xué)研究雖然已經(jīng)揭示了部分調(diào)節(jié)通路,但是和代謝網(wǎng)絡(luò)直接相關(guān)的是代謝產(chǎn)物。從茫茫多的代謝產(chǎn)物中選取研究對(duì)象,無(wú)疑是大海撈針。非靶向性代謝組學(xué)又稱為發(fā)現(xiàn)代謝組學(xué),主要是將對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的代謝組(某一生物體的全部代謝物)進(jìn)行比對(duì),以找出其代謝物的差異。代謝組學(xué)研究通過(guò)一定的手段能夠幫助研究員從眾多代謝產(chǎn)物挑出來(lái),提供一個(gè)“航拍”的視角,一目了然地發(fā)現(xiàn)差異性代謝產(chǎn)物。然后通過(guò)已知的代謝通路逆推找出調(diào)節(jié)酶和基因,完成疾病發(fā)病機(jī)制、有效制劑治療機(jī)制等方面的研究。
非靶向性代謝組學(xué)分析研究路線

非靶向性代謝組學(xué)分析研究技術(shù)
1. GC-MS(氣相色譜)是代謝組學(xué)研究的經(jīng)典技術(shù),具有技術(shù)成熟穩(wěn)定、分辨率高等特點(diǎn),同時(shí),由于具有相對(duì)完善的數(shù)據(jù)庫(kù),使得定性也更為準(zhǔn)確,缺點(diǎn)則主要表現(xiàn)在樣品處理復(fù)雜,并且對(duì)于不易衍生化的物質(zhì)定性和定量較困難,影響了該技術(shù)在更大范圍內(nèi)的應(yīng)用。
2. LC-MS(液相色譜)優(yōu)勢(shì)主要表現(xiàn)在樣品制備和前處理簡(jiǎn)單、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好,分辨率高,分離和分析范圍廣,缺點(diǎn)則主要表現(xiàn)在數(shù)據(jù)庫(kù)完善程度不夠,定性相對(duì)困難。
關(guān)于樣品
1. 微生物和細(xì)胞樣本:迅速鈍化代謝活動(dòng)(淬滅),同時(shí)保持細(xì)胞不裂解
2. 動(dòng)物體液(如尿、血、組織、器官、唾液):采樣后要迅速預(yù)處理,如加入抗凝血?jiǎng)⒎栏瘎?,并立即冷凍處理?80℃)
3. 植物樣本:采集后迅速冷凍(液氮),然后轉(zhuǎn)入-80℃保存,200mg/例
4. 血清樣品:500ul/例(不得低于200ul/例),一定避免反復(fù)凍融。(血液收集在離心管中靜置30分鐘進(jìn)行凝固。然后離心取上清裝載于干凈的離心管中,再離心5分鐘,8000rpm,取上清分裝到凍存管中,每管0.5ml,-80℃凍存寄送。)
5. 尿液樣品:1ml/例,原則上可以多取一點(diǎn)(尿液直接分裝到離心管中,每管1ml,添加一滴(約10ul)質(zhì)量體積為1/100(w/v)的疊氮化鈉,-80℃凍存寄送)