一、配制培養(yǎng)基時的注意事項

01?培養(yǎng)基在滅菌前，需進(jìn)行加熱溶解（含瓊脂的培養(yǎng)基需煮沸4-6次至瓊脂完全溶解），再進(jìn)行分裝滅菌（應(yīng)不超過1000mL）；

02?含瓊脂培養(yǎng)基，若滅菌前未進(jìn)行加熱溶解，滅菌后需充分搖勻使用；

03?所有培養(yǎng)基不宜滅菌過度和長時間保溫，特別是含糖量高的培養(yǎng)基，如沙氏葡萄糖瓊脂，滅菌過度或保溫時間過長易使葡萄糖發(fā)生焦化，滅菌后的培養(yǎng)基顏色會變深，pH會下降，此外還會使蛋白胨中的維生素分解，降低培養(yǎng)基的營養(yǎng)；

04?需另加添加劑的培養(yǎng)基通常在培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時加入，已加入添加劑的瓊脂類培養(yǎng)基不可熔化再次使用；

05?配制好的培養(yǎng)基需及時滅菌，不可久置；

06?培養(yǎng)基不可重復(fù)滅菌；

07?瓊脂培養(yǎng)基不可反復(fù)熔化使用；待用的瓊脂培養(yǎng)基可置47-50℃水浴保溫或50-60℃烘箱保溫，一般不可超過4小時；

08?使用蒸餾水或純化水配制。飲用水或自來水中由于含礦物鹽離子，配制培養(yǎng)基會產(chǎn)生渾濁現(xiàn)象；

09?容器不易過滿，容量至少應(yīng)比培養(yǎng)基體積大20%。

二、配制過程中的常見問題分析

01 培養(yǎng)基顏色不正確

（1）含有酸堿指示劑的培養(yǎng)基，若顏色不正確，通常是由于pH不正確導(dǎo)致的，加熱過度、錯誤的滅菌方式等都會導(dǎo)致此項問題。
（2）加熱過度導(dǎo)致某些成分分解或糖焦化，如SC培養(yǎng)基(SC增菌液)加熱過度會變紅，含糖量高的培養(yǎng)基，加熱過度通常會出現(xiàn)顏色加深，呈焦糖色或棕褐色。
（3）某些成分變質(zhì)，如血液久置易變黑，制成的平板顏色偏棕黑色。

02 培養(yǎng)基不凝固或凝固性差

（1）稱量錯誤
（2）瓊脂分布不均勻
（3）培養(yǎng)基pH不正確
（4）加熱過度
（5）瓊脂量不足

滅菌前未加熱溶解，滅菌后未充分搖勻， ?
? ?會出現(xiàn)分層現(xiàn)象，瓊脂凝固在底層，上層不凝固

03 培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀

（1）某些培養(yǎng)基原本就含有不溶性沉淀，如TTB，MC培養(yǎng)基等，配方中含有大量不溶性碳酸鈣。
（2）滅菌前未充分溶解，如Fraser培養(yǎng)基中含有大量磷酸鹽，若滅菌前溶解不充足，滅菌后就會出現(xiàn)大量沉淀。
（3）pH不正確，偏酸或偏堿都有可能使培養(yǎng)基中的部分金屬離子產(chǎn)生沉淀。
（4）水的純度不夠，天然水中含有較多的礦物鹽離子，若未除凈，則易與培養(yǎng)基中的磷酸鹽反應(yīng)生成沉淀。
（5）添加劑加入溫度不正確，卵黃、血液等對溫度敏感的添加成分，若加入時溫度過高或溫差過大，易出現(xiàn)凝塊。
（6）稱量錯誤。
（7）試劑加入順序不正確。

04 培養(yǎng)基污染

（1）滅菌方式不正確，導(dǎo)致滅菌不徹底
（2）滅菌鍋的滅菌效力不達(dá)標(biāo)
（3）滅菌量過多，滅菌前未加熱溶解
（4）培養(yǎng)基本身含耐熱菌較多
（5）滅菌過程中，滅菌鍋內(nèi)冷空氣未排干凈
（6）滅菌鍋放置過滿
（7）操作過程發(fā)生污染
（8）分裝培養(yǎng)基器皿滅菌不充分
（9）濾膜破損

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