鈣黃綠素-AM (Calcein-AM)?和碘化丙啶?(PI)?溶液，分別對活細(xì)胞和死細(xì)胞染色，可同時(shí)使用，對活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行熒光染色。Calcein-AM?的乙酸甲基酯親脂性很高，使其可透過細(xì)胞膜。盡管?Calcein-AM?本身并不是熒光分子，但通過活細(xì)胞內(nèi)的酯酶作用，Calcein-AM?能脫去?AM?基，產(chǎn)生的?Calcein?能發(fā)出強(qiáng)綠色熒光?(激發(fā): 490 nm，發(fā)射: 515 nm)，因此?Calcein-AM?僅對活細(xì)胞染色。另一方面，作為核染色染料的?PI?不能穿過活細(xì)胞的細(xì)胞膜，它穿過死細(xì)胞膜的無序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核，并嵌入細(xì)胞的?DNA?雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光?(激發(fā): 535 nm，發(fā)射: 617 nm)。由于?Calcein?和PI-DNA都可被?490 nm?激發(fā)，因此可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。用?545 nm?激發(fā)，僅可觀察到死細(xì)胞。

艾美捷?Biogradetech?Calcein-AM/PI，活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒：

中文名稱：Calcein-AM/PI，活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒

英文名字：Calcein-AM/PI, Live/Dead Cell Double Staining Kit

Biogradetech貨號(hào)：B-CHK103-500T

規(guī)格：500T

保存建議：Calcein-AM/PI，活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒保存：-20℃干燥避光 有效期一年。

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Calcein-AM/PI，活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒使用方法：

以?HeLa?細(xì)胞染色為例，請注意不同的細(xì)胞種類、不同濃度，有不同的觀察條件。

1.?染色工作液的配制

添加?2.5 μl Calcein-AM?儲(chǔ)備液（4mM）和?12.5 μl PI（2mM）儲(chǔ)備液至?5 ml PBS?中配制成染色溶液。Calcein-AM的終濃度為?2 μM，PI?的終濃度為?5 μM。

注意：由于?Calcein-AM?的穩(wěn)定性比較差，此染色工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，并且在當(dāng)天用完。

2.?細(xì)胞染色

1)?染色?HeLa?細(xì)胞等貼壁細(xì)胞時(shí)，先用?Trypsin-EDTA?等消化細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液。

2)?將細(xì)胞懸液離心?3?分鐘?(1,000 rpm)。

3)?去除上清液，加入?PBS?緩沖液，細(xì)胞數(shù)量調(diào)整至?1×105-1×106個(gè)/ml。再用移液器充分混勻。

4)?由于培養(yǎng)基中的血清等成分含有酯酶，Calcein-AM?會(huì)分解，會(huì)導(dǎo)致空白上升，所以需要離心數(shù)次，用PBS?洗滌數(shù)次直到完全洗凈。

5)?將?200 μl?細(xì)胞懸液移至小試管中，加入?100 μl?染色溶液，在?37℃下孵育?15?分鐘。

6)?在蓋玻片上滴加適量的染色的細(xì)胞溶液。

7)?在熒光顯微鏡下，先用?490±10 nm?波長激發(fā)，觀察黃綠色的活細(xì)胞，還可以同時(shí)觀察到紅色的死細(xì)胞，然后用545 nm波長激發(fā)，能夠看到紅色的死細(xì)胞。