結(jié)合疫苗又稱為偶聯(lián)疫苗，是一種使用載體蛋白來攜帶抗原的疫苗。載體蛋白可以是病毒樣顆粒（VLPs）、細(xì)菌樣顆粒（BLPs）或其他蛋白質(zhì)納米顆粒。這些載體蛋白可以通過基因工程技術(shù)在表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生，并且具有自組裝的能力，形成具有抗原特異性的顆粒結(jié)構(gòu)。在結(jié)合型疫苗中，抗原會與載體蛋白相結(jié)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物。這種復(fù)合物能夠激活免疫系統(tǒng)并誘導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)。在這種疫苗中，載體蛋白的結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性對疫苗的效果有重要影響。其中，二硫鍵是維持蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵因素，可以增強(qiáng)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和耐受性，對于控制疫苗質(zhì)量和增強(qiáng)疫苗效果具有重要作用。

蛋白質(zhì)二硫鍵分析的大體思路如下：首先將樣品蛋白水解為肽段混合物，這個過程中要避免二硫鍵發(fā)生重排或交換，然后對肽段混合物進(jìn)行分離、鑒定，再斷開肽鏈中的二硫鍵并與整個氨基酸序列進(jìn)行比對，以此推斷二硫鍵在肽段中的位置。目前常用的檢測二硫鍵的方法包括非片段法的X射線晶體衍射法、多維核磁共振波譜法等以及片段法的對角線電泳法、Edman降解法、氨基酸序列分析法和基于質(zhì)譜的檢測方法。

生物制品表征二硫鍵分析示意圖

質(zhì)譜技術(shù)檢測范圍廣、分辨率高、準(zhǔn)確度好、分析速度快，已廣泛運(yùn)用于蛋白二硫鍵的分析檢測。利用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜可以對單個或混合體系中的蛋白質(zhì)二硫鍵進(jìn)行檢測、以及定位定量分析。由于二硫鍵容易還原而斷裂，因此在提取分離蛋白質(zhì)時要嚴(yán)格控制實驗條件，避免原有的二硫鍵斷裂或發(fā)生錯配。

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