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淺談提取RNA常見誤解|杭州昊鑫

2022-07-08 11:29 作者:昊鑫生物  | 我要投稿

提取RNA常見誤解(之一)

誤認(rèn)為RNA提取一定要4度離心。離心柱提取,上離心柱也用4度離心。其實(shí)這是錯誤的。4度離心只有壞處,沒有好處。


提取RNA常見誤解(之二)

誤認(rèn)為提取RNA/DNA不用跑電泳,只要測OD吸光值/OD比值就可以知道濃度和純度。核酸純化,大家最大的誤解,就以為測出來OD值吸光值就是測出來了核酸的濃度,這個概念大錯特錯了。測OD值,只是測總吸光值,它不能等同于測的是真實(shí)核酸濃度??偽庵悼梢詠碓从谡嬲暮怂?,也包含來源于殘留的雜質(zhì),殘留的蛋白,殘留的降解的RNA/DNA,它們都有吸光值,所以測量的總吸光值OD值換算的濃度,不代表這都是純核酸的濃度,也可能包含了來源于殘留的雜質(zhì),降解的RNA,殘留的蛋白等等的吸光值換算的濃度。這當(dāng)然不是真正的純核酸的濃度。只有在你提供的核酸(RNA,DNA)是100%純的時候,測量的OD值濃度才是真正能100%換算成核酸濃度。 舉個例子,我給你一個完全降解的RNA,你去測量OD值吸光值,它的吸光值也會很高,機(jī)器把吸光值換算成的濃度很高,但是這個你能用嗎?RNA已經(jīng)完全降解了,跑電泳啥也沒有。 再舉個例子,你提取DNA完全失敗了(完全沒提取到DNA),但是里面殘留了一堆的蛋白雜質(zhì)和降解的RNA片段,你去測量吸光值OD值,也非常的高,機(jī)器換算成濃度也非常高。但是你能說你提取成功了DNA么? 你跑電泳一看,啥DNA條帶也沒有,只有前面殘留一堆的降解的RNA片段。


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