SDS-PAGE分析
SDS-PAGE(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳是Ulrich K. Laemmli開發(fā)的一種不連續(xù)電泳系統(tǒng),常用于分離和鑒定分子量在250 kDa之內(nèi)的蛋白質(zhì)混合物。十二烷基硫酸鈉(SDS,也稱為十二烷基硫酸鈉)和聚丙烯酰胺凝膠的聯(lián)合使用可以消除結(jié)構(gòu)和電荷的影響,使蛋白質(zhì)僅根據(jù)其分子量的差異進(jìn)行分離,常用于復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物的高分辨率分離實(shí)驗(yàn)。
SDS-PAGE又稱1D SDS-PAGE(一維凝膠電泳),根據(jù)蛋白質(zhì)的相對分子量大小實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的分離,與高分子量蛋白質(zhì)相比,較低分子量的分子在凝膠中遷移得更快。因此,電泳結(jié)束后高分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)仍然靠近點(diǎn)樣孔。在1D SDS-PAGE的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的2D SDS-PAGE(二維凝膠電泳)根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子質(zhì)量兩個屬性對其進(jìn)行分離,在2D凝膠電泳中,蛋白質(zhì)先在固定pH梯度上進(jìn)行第一維分離,再使用垂直或水平聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行二維分離,這種分離方法大大提高了蛋白質(zhì)的分辨率。SDS-PAGE已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)樣品純度的評估、蛋白質(zhì)表達(dá)的評估、蛋白質(zhì)的免疫化學(xué)鑒定以及定量鑒定等。
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