單克隆抗體（Monoclonal antibodies，mAb）是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。單克隆抗體不僅是生物化學(xué)、分子生物學(xué)中必不可少的工具，其在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用也以革命性的速度改進(jìn)了多種疑難雜癥的治療方法。

1975年Kohler和Milstein提出的雜交瘤技術(shù)（Hybridoma technology），證明了骨髓瘤細(xì)胞與免疫的動(dòng)物脾細(xì)胞融合，可以形成能分泌針對(duì)該抗原的均質(zhì)的高特異性的抗體—單克隆抗體，這種技術(shù)統(tǒng)稱(chēng)為雜交瘤技術(shù)使制備純一抗體的難題獲得了解決，為基礎(chǔ)研究及其臨床應(yīng)用提供了無(wú)限潛力。

而在經(jīng)過(guò)近50年的發(fā)展，單克隆抗體制備方法不再局限于雜交瘤技術(shù)（Hybridoma technology），噬菌體展示技術(shù)（Phage display）、人源抗體轉(zhuǎn)基因小鼠（Human antibody-producing mice）和單B細(xì)胞抗體技術(shù)（Single B cell antibody technology）等技術(shù)也都陸續(xù)登上舞臺(tái)。目前主流的三種技術(shù)平臺(tái)雜交瘤技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、單B細(xì)胞抗體技術(shù)雖然有各自的局限性，但都已廣泛應(yīng)用于單克隆抗體篩選。

雜交瘤技術(shù)

雜交瘤技術(shù)的基本原理是通過(guò)融合兩種細(xì)胞而同時(shí)保持兩者的主要特征。這兩種細(xì)胞分別是經(jīng)抗原免疫的小鼠脾細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞。被特異性抗原免疫的小鼠脾細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞）的主要特征是它的抗體分泌功能，但不能在體外連續(xù)培養(yǎng)，小鼠骨髓瘤細(xì)胞則可在培養(yǎng)條件下無(wú)限分裂、增殖，即具有所謂永生性。在選擇培養(yǎng)基的作用下，只有B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的雜交細(xì)胞才能具有持續(xù)培養(yǎng)的能力，形成同時(shí)具備抗體分泌功能和保持細(xì)胞永生性?xún)煞N特征的細(xì)胞克隆。

雜交瘤技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于：

1.技術(shù)發(fā)展已經(jīng)成熟，受到廣大的認(rèn)可

2.技術(shù)研發(fā)成本較低

缺點(diǎn)在于：

1.制備時(shí)間較長(zhǎng)，重復(fù)生產(chǎn)性能差

2.效率低，脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合效率率低

3.有一定的局限性，不能制備無(wú)免疫性和高毒性的抗原的抗體

4.雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)不穩(wěn)定，批次間差異大

5.抗體需要進(jìn)一步人源化改造

噬菌體展示技術(shù)

噬菌體展示技術(shù)是將多肽或蛋白質(zhì)的編碼基因或目的基因片段克隆入噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，在閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常功能的情況下，使外源多肽或蛋白與外殼蛋白融合表達(dá)，融合蛋白隨子代噬菌體的重新組裝而展示在噬菌體表面。

單抗制備中的噬菌體展示技術(shù)及噬菌體抗體庫(kù)項(xiàng)技術(shù)，是抗體庫(kù)技術(shù)的一個(gè)突破性進(jìn)展，它在篩選時(shí)檢測(cè)的不是細(xì)菌克隆的可溶性表達(dá)產(chǎn)物，而是噬菌體載體轉(zhuǎn)化細(xì)菌后，融合表達(dá)在噬菌體顆粒表面上的Fab 或scFV，稱(chēng)為噬菌體抗體。通過(guò)多輪的抗原吸附-洗脫-擴(kuò)增，最終篩選到的所需的抗體克隆，從而大大簡(jiǎn)化了篩選過(guò)程。篩選到的噬菌體抗體克隆可應(yīng)用插入琥珀突變子及不能通讀琥珀突變的受體菌獲得可溶性的Fab 或scFV。

噬菌體展示技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于：

1.篩選時(shí)間短，可以靈活設(shè)計(jì)方案

2.在方法上可避開(kāi)人工免疫階段

3.可制備無(wú)免疫性和高毒性的抗原的抗體

缺點(diǎn)在于

1.重鏈輕鏈非天然配對(duì)

2.抗體形式以Fab或scFV為主

3.常用的噬菌體展示文庫(kù)庫(kù)容一般限制在10?，限制了開(kāi)發(fā)過(guò)程中抗體分子多樣性

單B細(xì)胞抗體技術(shù)

雖然雜交瘤技術(shù)和噬菌體展示技術(shù)已經(jīng)在單克隆抗體生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用，但它們依然存在較難克服的缺點(diǎn)制約著抗體生產(chǎn)過(guò)程。近些年，為了克服雜交瘤技術(shù)細(xì)胞融合效率低，噬菌體展示技術(shù)導(dǎo)致重鏈、輕鏈的天然同源配對(duì)丟失等問(wèn)題，單B細(xì)胞抗體技術(shù)正被逐步開(kāi)發(fā)和應(yīng)用。

基于最新的單B細(xì)胞抗體發(fā)現(xiàn)技術(shù)的SingleB?快速發(fā)現(xiàn)服務(wù)，結(jié)合了單細(xì)胞分離鑒定技術(shù)和高通量測(cè)序技術(shù)，以單個(gè)B細(xì)胞為起始點(diǎn)，快速獲得抗原特異性抗體。SingleB?快速發(fā)現(xiàn)服務(wù)適用于多個(gè)動(dòng)物物種，抗體發(fā)現(xiàn)效率高、處理通量高。獲得的抗體經(jīng)體內(nèi)天然成熟，具有豐富的基因多樣性，可以為抗體藥開(kāi)發(fā)及多種下游應(yīng)用，提供更多的候選抗體分子。

SingleB?快速發(fā)現(xiàn)技術(shù)相對(duì)于以上雜交瘤和噬菌體技術(shù)具有以下優(yōu)勢(shì)：

1.在開(kāi)發(fā)周期上更有優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)了快速、高通量，不受轉(zhuǎn)化效率的限制

2.保證抗體的輕重鏈天然配對(duì)

3.適用于多動(dòng)物物種抗體開(kāi)發(fā)，可開(kāi)發(fā)全人源抗體、人源化小鼠單抗、小鼠單抗、大鼠單抗、兔單抗、羊單抗、納米（羊駝）抗體、豬單抗等

4.最大限度保留B細(xì)胞多樣性，篩選抗體具有高度抗原特異性、高親和性、高多樣性等優(yōu)點(diǎn)