一、細胞概述

RAW264.7中文全名為小鼠單核巨噬細胞白血病細胞，來源于雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤，是常用的炎癥細胞模型之一，常見于研究細胞吞噬、細胞免疫、分子免疫學。

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RAW 264.7 是一種單核細胞/巨噬細胞系，具有松散貼壁的立方形或紡錘形細胞和圓形活細胞。細胞松散附著、堆積并變圓是正常的，尤其是在培養(yǎng)密集時?；罴毎梢苑蛛x和漂浮，特別是當培養(yǎng)物變得更加融合時。這些未附著的細胞仍然有活力，應通過溫和離心保留下來，然后重新加入燒瓶中。不同批次血清的細微差異會導致 RAW 264.7 細胞或多或少的附著。我們使用未經(jīng)熱滅活的優(yōu)質(zhì)血清，因為熱滅活可以減少附著因子和生長因子。

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二、細胞培養(yǎng)條件

三、細胞培養(yǎng)建議

1、細胞復蘇：

將含有1m細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5ml培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，補加4-6ml完全培養(yǎng)基吹勻。然后將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中過夜，第二天檢查細胞密度并換液。

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2、細胞傳代：

當細胞密度達到80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

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2.1

棄去培養(yǎng)液上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS （BC-BPBS-01）潤洗細胞2次。

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2.2

加1-2ml消化液 0.25%Trypsin-EDTA(BC-CE-005)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，鏡下觀察細胞大部分圓縮并脫落，肉眼觀察細胞培養(yǎng)瓶上部細胞呈掛線狀滑落，迅速拿回操作臺，于手心輕敲幾下培養(yǎng)瓶，可見細胞呈沙粒狀滑落，加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

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2.3

輕輕吹打細胞，完全脫落分散后吸出，在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，補加1-2ml吹勻。

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2.4

按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞重懸按1：2到1：4的比例分到新的培養(yǎng)瓶中。

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3、細胞凍存

??凍存條件：20%FBS的培養(yǎng)基+10%DMSO（或使用細胞凍存液BC-CFM-01），2-8℃放置2小時，再將凍存管置于梯度降溫凍存盒并放于-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮罐進行保存。