背景

2018年6月，全球監(jiān)管機構(gòu)收到一批纈沙坦活性物質(zhì)中存在N-亞硝基二甲胺（NDMA）的報告，隨后在雷丁替尼、二甲雙胍、利福平等藥物中也檢出了N-亞硝胺雜質(zhì)。同年成立了“亞硝胺國際戰(zhàn)略小組（NISG）”，2020年底成立了“亞硝胺國際技術(shù)工作組（NITWG）”，旨在共享與亞硝胺相關(guān)的科學(xué)知識和當(dāng)前對技術(shù)安全和質(zhì)量問題的思考，并在可能的情況下促進成員轄區(qū)之間的技術(shù)融合。FDA及EMA相繼出臺了N-亞硝胺雜質(zhì)相關(guān)的文件。本文將從N-亞硝胺雜質(zhì)的控制策略、限度制定、控制方式等方面進行闡述。

一、控制策略：

1、對于已上市藥品通常采用三步方法來進行評估和控制亞硝胺雜質(zhì)。

a）風(fēng)險評估：上市許可持有人（MAH）進行風(fēng)險評價，以確定API和/或成品藥是否可能存在亞硝胺風(fēng)險；

b）確認(rèn)性檢測：如果發(fā)現(xiàn)風(fēng)險，MAH將接著進行確認(rèn)性檢測，以確認(rèn)或排除亞硝胺的存在。MAH應(yīng)盡快報告結(jié)果；

c）如果確認(rèn)存在亞硝胺，MAH應(yīng)通過提交變更，實施有效的風(fēng)險減輕措施。

2、對于暫未申報的品種，首先應(yīng)進行風(fēng)險評估，若經(jīng)評估不會產(chǎn)生亞硝胺雜質(zhì)，則遞交風(fēng)險評估報告；若經(jīng)評估可能會產(chǎn)生亞硝胺雜質(zhì)，則進行確認(rèn)性檢測，根據(jù)檢測結(jié)果選擇常規(guī)檢測、跳檢或免檢。

二、限度制定：

1、單個N-亞硝胺雜質(zhì)限度制定：

a）特定的N-亞硝胺雜質(zhì)根據(jù)官方公布的每日可接受攝入量（AI）計算限度，如DNMA、NDEA等（詳見表1，數(shù)據(jù)來源：EMA亞硝胺雜質(zhì)控制問答）；

b）無官方限度，有TD50數(shù)據(jù)的，根據(jù)TD50計算每日可接受攝入量（TD50（mg/kg/day）×50kg/50000）（詳見ICH M7）；

c）無官方限度、無TD50數(shù)據(jù)的，可按亞硝胺類特定的TTC 18ng/天計算；

▲ 表1 特定N-亞硝胺每日可接受攝入量

2、含有一種以上N-亞硝胺雜質(zhì)的產(chǎn)品限度制定：

a）N-亞硝胺含量低于其各自限度的10%時，在計算單個或總N-亞硝胺的限度時無需考慮，但工藝和控制設(shè)計時應(yīng)盡可能防止或減少產(chǎn)生N-亞硝胺雜質(zhì)；

b）從檢出量≥10%限度的N-亞硝胺雜質(zhì)中選擇最低的限度作為總N-亞硝胺的限度；

c）每種N-亞硝胺雜質(zhì)的限度設(shè)定為其限度的一定百分比，所有百分比之和不超過100%，如某原料每日可接受攝入量為10mg，NDMA、NDEA、NDPA檢出量均大于其限度的10%，按三種雜質(zhì)單獨的限度為9.6ppm、2.65ppm、2.65ppm，則可設(shè)置上述三種雜質(zhì)的限度分別為4.8ppm（50%）、0.79ppm（30%）、0.53ppm（20%）。此時無需設(shè)置總N-亞硝胺限度。

d）單個N-亞硝胺的限度按上文中提到的方案制定，同時制定總雜，所有N-亞硝胺的檢出量與其限度的百分比之和不得超過100%。如上例中，NDMA、NDEA、NDPA實際檢出量分別為4.8ppm（50%）、0.79ppm（30%）、0.53ppm（20%），三者百分比值和不超過100%，符合要求，若NDMA檢出量為5.76ppm（60%），三者百分比之和超過100%，則不符合要求。

3、其他情況：

a）當(dāng)在治療劑量下API本身具有顯著的致突變性/致染色體斷裂性風(fēng)險時，控制N-亞硝胺限度應(yīng)不大于ICH Q3A/B的界定限。

b）適用于ICH S9指南范圍內(nèi)定義的晚期癌癥的產(chǎn)品，控制N-亞硝胺限度應(yīng)不大于ICH Q3A/B的界定限。

c）“短于壽命”(LTL)方法只能在與主管當(dāng)局協(xié)商后作為臨時措施考慮，直到可以采取進一步措施將N-亞硝胺雜質(zhì)減少至以上提到的限度以下。

三、N-亞硝胺雜質(zhì)的控制方式：

N-亞硝胺雜質(zhì)一般或推薦在成品中控制，但如果確定了雜質(zhì)的來源，也可以采用ICH M7指南中所述的控制方法1-3進行控制。N-亞硝胺雜質(zhì)的控制方式主要有以下3種方式：

1、常規(guī)檢測；

2、免檢：至少6個中試規(guī)模批次或3個生產(chǎn)規(guī)模批次的檢測結(jié)果均低于限度的10%；

3、跳檢：至少6個中試規(guī)模批次或3個生產(chǎn)規(guī)模批次的檢測結(jié)果均低于限度的30%。

需要注意的是，3種控制方式對分析方法的靈敏度具有不同的要求：

1、常規(guī)檢測時，LOQ應(yīng)≤雜質(zhì)限度；

2、免檢時，LOQ應(yīng)≤10%限度；

3、跳檢時，LOQ應(yīng)≤30%限度。

因此，如果樣品中N-亞硝胺雜質(zhì)檢出量低于10%限度，想要免檢時，對應(yīng)的分析方法應(yīng)有足夠的靈敏度。

四、總結(jié)

N-亞硝胺化合物是一類被ICH M7列為“關(guān)注隊列”的雜質(zhì)，該類化合物存在較高的致癌風(fēng)險，已成為制藥行業(yè)和全球監(jiān)管機構(gòu)的關(guān)注問題。N-亞硝胺化合物產(chǎn)生原因較多，主要有工藝產(chǎn)生（如在同一工藝步驟使用了能引入仲胺和亞硝化試劑的物料等）、降解產(chǎn)生（如雷尼替丁在高溫下會產(chǎn)生亞硝胺類雜質(zhì)等）、污染引入（如使用了回收的DMF、鄰二甲苯等）等產(chǎn)生途徑。制藥企業(yè)應(yīng)積極配合監(jiān)管機構(gòu)，制定有效的控制措施，以消除或減少患者藥品中可接觸的N-亞硝胺雜質(zhì)的水平，確保上市藥物的持續(xù)安全性和質(zhì)量可控制性。

參考文獻：

1、Dobo KL, Kenyon MO, Dirat O, Engel M, Fleetwood A, Martin M, Mattano S, Musso A, McWilliams JC, Papanikolaou A, Parris P, Whritenour J, Yu S, Kalgutkar AS 2022. Practical and Science-Based Strategy for Establishing Acceptable Intakes for Drug Product N-Nitrosamine Impurities. Chemical Research in Toxicology 35(3):475-489.

2、EMA Questions and answers for marketing authorisation holders/applicants on the CHMP Opinion for the Article 5(3) of Regulation (EC) No 726/2004 referral on nitrosamine impurities in human medicinal products.

3、FDA Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs（Guidance for Industry）。

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