D-螢光素是螢火蟲螢光素酶的化學(xué)發(fā)光底物。 它在存在 ATP 的情況下通過(guò)螢光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光。 D-螢光素可用于測(cè)定與感興趣的啟動(dòng)子相連的螢光素酶基因的表達(dá)。

d-熒光素鉀鹽熒光原理

D-熒光素（D-Luciferin）為熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。原理是在熒光素酶和ATP的作用下，D-Luciferin能夠被氧化發(fā)光。若存在過(guò)量的熒光素時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)和熒光素酶的濃度成正相關(guān)。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，導(dǎo)入研究動(dòng)物（如小鼠）體內(nèi)，之后注入熒光素，通過(guò)生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)，或藥物的治療效果等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光的強(qiáng)度變化，指示能量或生命體征。

d-熒光素鉀鹽使用方法

一、體外生物發(fā)光檢測(cè)
1. 用無(wú)菌純凈水 對(duì) D-熒光素鉀鹽 進(jìn)行溶解，配制 30mg/mL的 D-熒光素鉀鹽 儲(chǔ)備溶液 (100-200×) 搖均勻后即可使用，不能立即使用的 儲(chǔ)備液可進(jìn)行分裝后，在-20℃避光條件下保存，避免反復(fù)凍融，對(duì)時(shí)機(jī)活性造成影響；
2. 在37℃恒溫條件下預(yù)熱處理組織培養(yǎng)基10-20分鐘，再將處理后的培養(yǎng)基倒入儲(chǔ)存液中，稀釋至0.15-0.3 mg/mL（根據(jù)實(shí)驗(yàn)調(diào)節(jié)濃度）的工作液濃度；
3. 之后再去除混液中的細(xì)胞培養(yǎng)基；
4. 等待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，恒溫37℃條件下孵育5-10 min，之后再進(jìn)行圖像分析。
二、活體成像分析
1. 采用無(wú)菌的 DPBS緩沖液 (w/o Mg2+、Ca2+) 配制成為：15 mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液，混勻。
2. 使用水系0.2 μm真是濾器過(guò)濾對(duì)儲(chǔ)備液進(jìn)行除菌處理，處理后可即使使用，或者在-20℃避光條件下保存，避免反復(fù)凍融，對(duì)時(shí)機(jī)活性造成影響；
3. 腹腔注射（i.p.）：按照 150 mg/kg 的熒光素/體重濃度比例進(jìn)行注射；
4. 注射入體內(nèi)10-15 min后（等待光信號(hào)達(dá)到最強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）之后，再進(jìn)行成像分析；

d-熒光素鉀鹽應(yīng)用領(lǐng)域

1.螢火蟲螢光素酶長(zhǎng)期以來(lái)一直與抗體結(jié)合，并在使用螢光素作為檢測(cè)底物的免疫測(cè)定中用作標(biāo)記。與 HRP 和堿性磷酸酶相比，螢光素酶對(duì)化學(xué)修飾的耐受性較差。該酶的一個(gè)特別優(yōu)點(diǎn)是除了其高靈敏度外，哺乳動(dòng)物組織中的內(nèi)源性螢光素酶活性低。

2.螢光素酶的另一個(gè)重要用途是衛(wèi)生監(jiān)測(cè)領(lǐng)域。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測(cè)污染，因?yàn)榇嬖谟谒猩矬w中的 ATP 是產(chǎn)生發(fā)光所必需的。這種類型的 ATP 生物發(fā)光的主要應(yīng)用是通過(guò)測(cè)試食品加工廠的表面來(lái)確定設(shè)備或產(chǎn)品是否存在污染的質(zhì)量保證。