QZyme? 是一種標(biāo)記探針系統(tǒng)，用于在 qPCR 中靶向特定序列。 該探針使用脫氧核酶來切斷報(bào)告基因和猝滅劑之間的連接，并在探針與目標(biāo)序列雜交后發(fā)出熒光。 它包含三個(gè)組件，如通用寡核苷酸底物 (UOS)、目標(biāo)特異性反向引物 (TRP) 和催化 DNA 結(jié)構(gòu)序列 (SCD)。

通用寡核苷酸底物 (UOS)：用于催化 DNA 的序列。 它包含熒光報(bào)告分子和緊鄰淬滅熒光的淬滅劑。

目標(biāo)特異性反向引物 (TRP)：用作催化 DNA 模板的序列。

催化 DNA 結(jié)構(gòu) (SCD) 的序列：無活性且以反義方式起作用的序列。 催化 DNA 結(jié)構(gòu)是脫氧核酶。

圖 1. QZyme? 探針由通用寡核苷酸底物、目標(biāo)特異性反向引物和催化 DNA 結(jié)構(gòu)序列組成。

QZyme? PCR 探針如何工作？

催化 DNA 結(jié)構(gòu)引物的序列在第一個(gè)擴(kuò)增循環(huán)中得到延伸，其產(chǎn)物在第二個(gè)擴(kuò)增循環(huán)中用作模板。

目標(biāo)特異性反向引物以催化DNA結(jié)構(gòu)產(chǎn)物的序列為模板進(jìn)行延伸，生成含有活性催化DNA區(qū)域的新產(chǎn)物。

通用寡核苷酸底物與目標(biāo)特異性反向引物產(chǎn)物雜交，在 DNAzyme 的幫助下在下一步退火步驟中將其切割。

這種裂解將淬滅劑與報(bào)告分子分開，游離的報(bào)告分子可以發(fā)出熒光。

圖 2. QZyme? 探針與目標(biāo)序列結(jié)合。 反義序列得到延伸，激活通用寡核苷酸底物。 探針被切割后，報(bào)告基因游離并發(fā)出熒光。