一．如何合成多肽？

人工固相合成多肽一般是從序列的C端向N端逐個(gè)添加氨基酸。合生生物生物的多肽合成是基于PeptideSyn技術(shù)平臺(tái)的Fmoc或Boc法的多肽合成（兩種方法的合成步驟是相同的，只是α-氨基保護(hù)基 的脫除方式不同）。

這里以Fmoc保護(hù)策略法舉例說明。合成由下列幾個(gè)步驟組成：

①掛樹脂：根據(jù)訂單選用并稱取相應(yīng)量的樹脂，投入反應(yīng)器中溶脹備用。

②去保護(hù)：Fmoc保護(hù)的柱子和單體必須用20%piperidine去除氨基的保護(hù)基團(tuán)。

③檢測(cè)：檢測(cè)是否已經(jīng)把保護(hù)基去除，既是氨基是否已經(jīng)裸露出來。（昂拓萊司生物常用茚三酮作為檢測(cè)試劑，若結(jié)果是陽性，則判定氨基裸露）

④激活和交聯(lián)：下一個(gè)氨基酸的羧基被一種活化劑所活化。活化的單體與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián)，形成肽鍵。我們需要注意的是氨基酸的投入量不是隨意的。為保證肽鏈合成的準(zhǔn)確性；氨基酸，縮合劑以及堿是有一個(gè)比例的。這里提供一個(gè)參考比例。（規(guī)模（mol）：氨基酸：縮合劑：堿=1:3:3:6）

⑤檢測(cè)：檢測(cè)是否已經(jīng)把所需氨基酸連上。結(jié)果是陰性，判定氨基酸已經(jīng)完全連上。

⑥循環(huán)：反復(fù)循環(huán)②-⑤直到合成完成。

⑦將合成的肽從樹脂切割和去保護(hù)。（Fmoc策略用TFA（強(qiáng)酸）即可將多肽從樹脂上切下。）

固相合成肽鏈，為減少副反應(yīng)的發(fā)生，選用的部分氨基酸的側(cè)鏈?zhǔn)怯帽Ｗo(hù)基團(tuán)保護(hù)起來。但最終的成品只要肽鏈，既需要脫除保護(hù)基。一般為了方便操作，根據(jù)肽鏈上的不同保護(hù)基預(yù)先配好切割液。（在這里用合生生物生物常用的其中一種切割液配比舉例說明。E液配比：87.5%TFA+5%茴香硫醚+2.5%純水+2.5%苯酚+2.5%EDT）

⑧使用冰乙醚離心沉淀（至少要洗三遍）；洗脫、冷凍干燥。得出粗品進(jìn)行MS檢測(cè)和HPLC檢測(cè)。

二。能夠合成的多肽的最大長(zhǎng)度是多少？

人工合成多肽時(shí)，因?yàn)椴豢杀苊獾貢?huì)出現(xiàn)各種副反應(yīng)；肽鏈 越 長(zhǎng) 反應(yīng)循環(huán)次數(shù)多，副反應(yīng)就會(huì) 越 多，其目標(biāo)肽的回收率就 越 低。在不考慮氨基酸結(jié)構(gòu)，極性等影響時(shí)，肽鏈長(zhǎng)度太長(zhǎng)會(huì)使合成難度加大。

一般是對(duì)多肽進(jìn)行HPLC和MS檢測(cè)。多肽一般采用反相色譜法純化。以質(zhì)譜法測(cè)定肽的分子量來確定產(chǎn)品是否正確，MS檢測(cè)結(jié)果還可顯示大部分的主要雜質(zhì)。還可進(jìn)行凈含量檢測(cè)，如氨基酸分析或元素分析。這些方法可以證實(shí)多肽的氨基酸組成，他們均可作為多肽確認(rèn)的補(bǔ)充方法。合生生物生物對(duì)客戶提供的檢測(cè)。所有材料均嚴(yán)格保密。在發(fā)送產(chǎn)品時(shí)，同時(shí)免費(fèi)提供HPLC和MS檢測(cè)結(jié)果。如果客戶有需求，還可提供肽凈含量

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