骨折愈合動(dòng)物模型

無(wú)需外固定動(dòng)物模型【動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外包】

【造模方法】取成年健康新西蘭兔。用3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈注射麻醉，剪去前臂術(shù)區(qū)毛，臂部用橡皮帶捆扎作止血帶用,碘酒消毒,鋪無(wú)菌巾。取前臂背外側(cè)縱向切口，長(zhǎng) 3cm,逐層切開(kāi)，分離軟組織，向兩側(cè)牽開(kāi)肌肉，充分顯露橈骨。在橈骨中1/3 段或腕關(guān)節(jié)近側(cè)3cm處選點(diǎn)，用手術(shù)刀片切除0.3cm寬的骨膜顯露骨膜下骨質(zhì)，再用手鋸或電鋸切割造成寬為0.3cm 標(biāo)準(zhǔn)橫斷骨折，清洗術(shù)野后在骨折區(qū)可施加各種處理因素，也可不作處理直接閉合切口以作對(duì)照。于術(shù)后7天、14天、21天、28天或更長(zhǎng)的時(shí)間取材觀(guān)察骨折愈合情況。

【造模機(jī)制】在麻醉狀態(tài)下，通過(guò)手術(shù)造成動(dòng)物橈骨干骨折并產(chǎn)生少盤(pán)骨缺損(約0.3cm），利用骨折處周?chē)趋溃ǔ吖牵┑淖匀还潭?，骨折端可施加或不施加某種處理因素，在術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)取材檢測(cè)骨折斷端骨痂的生成及鈣化過(guò)程。

常用的觀(guān)察指標(biāo)：①術(shù)后攝X線(xiàn)片檢查骨折部位，作為原始骨折的對(duì)照；②脫鈣后行HE染色觀(guān)察骨痂內(nèi)膠原蛋白的分布和細(xì)胞的生長(zhǎng)情況；③電鏡觀(guān)察骨痂內(nèi)細(xì)胞及膠原的超微結(jié)構(gòu)；④骨痂組織的堿性磷酸酶活性；⑤免疫組織化學(xué)法檢測(cè)骨痂內(nèi)骨鈣素、骨形態(tài)發(fā)生蛋白及各種生長(zhǎng)因子的表達(dá)情況等。

【模型特點(diǎn)】本模型造模后通過(guò)尺骨可以可靠地維持橈骨實(shí)驗(yàn)性骨折兩端的少量分離（≤0.3cm）的狀態(tài)，而這種分離很小，可真實(shí)地模擬臨床上骨折患者的治療和骨折愈合過(guò)程。骨折斷端的少量分離便于研究斷端間骨痂的生長(zhǎng)規(guī)律，便于觀(guān)察在骨折斷端施加各種處理因素對(duì)骨折愈合的影響。

造模后通常經(jīng)歷2~3天的炎性反應(yīng)期，骨折端有血腫形成，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)清除壞死細(xì)胞及血腫，為組織修復(fù)掃清道路。此后，在豐富的血運(yùn)支持下，多種來(lái)源（主要是骨內(nèi)外膜、骨髓）的骨祖細(xì)胞、成纖維細(xì)胞向骨折斷端聚集并分化為成骨細(xì)胞或成軟骨細(xì)胞，它們分泌膠原和基質(zhì)而形成骨痂。骨外膜及骨內(nèi)膜骨痂多以膜內(nèi)成骨的方式成骨，橋梁骨痂和封閉骨痂主要以軟骨內(nèi)成骨的方式成骨。不同部位骨痂出現(xiàn)的順序是，骨外膜骨痂（4天）一封閉骨痂及橋梁骨痂（6~8天）→骨痂連接（8～10天）。類(lèi)骨質(zhì)生成量在第14天生成最多。鈣化通常出現(xiàn)在術(shù)后第13~15天，術(shù)后4周時(shí)骨缺損處已有骨性愈合。

【應(yīng)用范圍】在研究經(jīng)典的骨折愈合理論時(shí)，本模型常用于觀(guān)察骨折愈合過(guò)程中的細(xì)胞演化，骨痂的形成及其超微結(jié)構(gòu)變化規(guī)律；研究骨折愈合不同階段的各骨生長(zhǎng)和調(diào)節(jié)因子表達(dá)變化時(shí)相；研究微量直流電、電磁場(chǎng)、氧張力、自體骨髓、某些藥物等因素以及各種誘導(dǎo)因子或生長(zhǎng)因子對(duì)骨折愈合的影響，觀(guān)察骨折愈合過(guò)程中的骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)變化情況。

【注意事項(xiàng)】

1.為了方便手術(shù)，保持術(shù)野清晰，應(yīng)使用止血帶，減少手術(shù)中不必要的出血。

2.術(shù)中術(shù)野要顯露充分，除非特殊需要盡量用電鋸而不用手工鋸骨，這樣既可使切去的骨質(zhì)量一致，骨折斷端整齊，也可減少周?chē)浗M織的損傷。

3.術(shù)前認(rèn)真消毒，術(shù)中注意無(wú)菌操作，減少術(shù)后感染機(jī)會(huì)。

4.取材時(shí)，應(yīng)將骨折斷端骨痂連同其兩側(cè)的骨質(zhì)一并取出，這樣既可觀(guān)察斷端間不同骨痂的生物學(xué)特性，亦可觀(guān)察新生骨痂與原有骨質(zhì)之間的愈合情況，盡可能利用實(shí)驗(yàn)材料所提供的所有信息。

【模型評(píng)價(jià)】本模型造模后無(wú)需固定，操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好?？捎猛靡粋?cè)肢體作為實(shí)驗(yàn)組，另一側(cè)作為對(duì)照組，減少實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)誤差。由于兔這種動(dòng)物較小，價(jià)格較低，手術(shù)便于控制和操作，術(shù)后便于飼養(yǎng)觀(guān)察。本模型是研究骨折愈合理論最常用的模型。

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