在常溫下由化學反應產(chǎn)生的光，產(chǎn)生電子能級處于激發(fā)態(tài)的物質，后者通過躍遷釋放能量產(chǎn)生光子，從而導至的發(fā)光現(xiàn)象?；瘜W發(fā)光是一個多步驟的過程。

　　化學發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)誕生于1977年，是近十年來在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析，將高靈敏的化學發(fā)光技術與高特異性的免疫反應結合起來建立的微量測定技術，因此該技術靈敏度高、線性范圍寬、應用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(EIA)相比，操作簡便、反應快速、無放射污染，儀器簡單穩(wěn)定且可以實現(xiàn)自動化。

　一、化學發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統(tǒng)和化學發(fā)光分析系統(tǒng)。

　　免疫分析系統(tǒng)是指：抗原抗體標記化學發(fā)光物質或酶，經(jīng)過抗原與抗體反應形成抗原-抗體免疫復合物。

　　化學發(fā)光分析系統(tǒng)是指在免疫反應結束后，利用化學發(fā)光物質經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個激發(fā)態(tài)的中間體，這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時，同時發(fā)射出光子，利用發(fā)光信號測量儀進行檢測。根據(jù)化學發(fā)光標記物與發(fā)光強度的關系，可利用標準曲線計算出被測物的含量。

　　ECL化學發(fā)光法是目前常用、靈敏的WesternBlot檢測方法。由于這些底物不會在膜表面沉淀、牢牢結合在膜上，因此可以通過一抗二抗去除液(Strippingbuffer)將親和結合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足夠強烈而有效解離結合的抗體，也要足夠溫和使轉移的目標蛋白仍能完整地留在NC膜或PVDF膜上。通過使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用過的膜檢測其它蛋白。和重新跑一次SDS-PAGE膠相比，不僅省時省力，而且可以消除重新上樣而帶來的誤差，使可比性更強。

二、化學發(fā)光免疫分析的類型

分為直接化學發(fā)光免疫分析，化學發(fā)光酶免疫分析和電化學發(fā)光免疫分析。

1、直接化學發(fā)光免疫分析

用吖啶酯直接標記抗體(抗原)，與待測標本中相應的抗 原(抗體)發(fā)生免疫反應后，形成固相包被抗體-待測抗原吖啶酯標記抗體復合物，這時只需加入氧化劑（H2O2）和 NaOH使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、 發(fā)光 。

由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時間內(nèi)所產(chǎn)生 的光子能，這部分光的積分與待測抗原的量成正比，可從 標準曲線上計算出待測抗原的含量

2、化學發(fā)光酶免疫分析

化學發(fā)光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用參與催化某一化學發(fā)光反應的酶 如辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶(ALP)來標記抗原或抗 體，在與待測標本中相應的抗原(抗體)發(fā)生免疫反應后，形成 固相包被抗體-待測抗原-酶標記抗體復合物，經(jīng)洗滌后，加入底物(發(fā)光劑)，酶催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接收，光電倍增管將光信號轉變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯螅侔阉鼈儌魉椭劣嬎銠C數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計算出測定物的濃度

辣根過氧化物酶標記的化學發(fā)光免疫分析

該分析系統(tǒng)采用辣根過氧化物酶（HRP）標記抗體(或抗原)，在與反應體系中的待測標本和固相載體發(fā)生免疫反應后，形成固相包 被抗體-待測抗原-酶（HRP）標記抗體復合 物，這時加入魯米諾發(fā)光劑、H2O2和化學發(fā) 光增強劑使產(chǎn)生化學發(fā)光。

三、電化學發(fā)光免疫分析電化學發(fā)光免疫分析 （electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以電化學發(fā)光劑三聯(lián)呲啶釕標記抗體(抗原)，以三丙胺(TPA)為電子供體，在電場中因電子轉移而發(fā)生特異性化學發(fā)光反應，它包括電化學和化學發(fā)光兩個過程。

四、化學發(fā)光免疫學優(yōu)點：

1.靈敏度高：是其關鍵的優(yōu)越性。它能夠檢出放射性免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無法檢出的物質，對疾病的早期診斷有著十分重要的意義。

2.寬的線性動力學范圍：發(fā)光強度在4-6個量級之間，與測定物質濃度間呈線性關系。這與顯色酶聯(lián)免疫吸光度（OD 值）2.0 的范圍相比，優(yōu)勢十分明顯。雖然同位素放射免疫也有較寬的線性動力學范圍，但是放射性限制其應用。

3.光信號持續(xù)時間長：其光信號持續(xù)時間可達數(shù)小時甚至可達一天，簡化了實驗操作及測量。

4.分析方法簡便快速：絕大多數(shù)分析測定僅需加入一種試劑（或符合制劑）的一步模式。

5.結果穩(wěn)定、誤差?。簶颖颈旧戆l(fā)光，不需要額外光源，避免了外來因素的干擾（光源穩(wěn)定性、光散射、光波選擇器），分析結果穩(wěn)定可靠。

6.安全性好及使用期長：目前為止還未發(fā)現(xiàn)化學發(fā)光免疫分析試劑的危害性；另外這些試劑穩(wěn)定，保存期可以達到一年之久。