1.ATP+DNAligase(E)—>E-AMP+PPi(2Pi)2.

E-AMP 上的AMP連接到5’磷酸基上使其活化，釋放出連接酶。3.活化的5’磷酸基與相鄰的3’- OH形成磷酸二酯鍵，釋放出AMP。