熒光標記CHO 細胞總蛋白/熒光標記靶蛋白/熒光標記cofilin絲切蛋白
2022-08-29 10:33 作者:ruixishengwu | 我要投稿
Cofilin是一種肌動蛋白結合蛋白,屬于肌動蛋白解聚因子家族成員,普遍存在于真核細胞.作為肌動蛋白動力學的關鍵調節(jié)因子,絲切蛋白cofilin參與了多種細胞活動,包括細胞凋亡,細胞運動及胞質分裂等.
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絲切蛋白cofilin小干擾RNA(cofilinsiRNA)敲低cofilin表達后對U251侵襲遷移能力的影響及機制.方法免疫組化染色檢測對照腦組織中cofilin蛋白的表達.選取U251作為研究對象,將實驗分為三組:即siRNA-cofilin組(cofilin干擾組),siRNA-NC組(陰性對照組)和control組(空白對照組).cofilinsiRNA在脂質體lipofectamineTM3000介導下轉染體外常規(guī)培養(yǎng)的U251膠質瘤細胞.RT-PCR法和western blot法驗證三組中cofilinmRNA和蛋白的表達情況.
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免疫熒光法觀察三組細胞cofilin的定位以及細胞片狀偽足形態(tài)變化.結果免疫組化結果顯示cofilin蛋白在正常腦組織呈弱陽性表達.成功轉染cofilin,RT-PCR及Western blot顯示cofilinmRNA和蛋白表達下降(P<0.01).

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