rTEV protease?產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

FrdE00014

rTEV ? protease

500U/1000U/10KU

保存條件：-20℃，一年有效。

1.產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

重組型TEV蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強(qiáng)的穩(wěn)定性和特異性。rTEV是一種用來切除融合蛋白上親和標(biāo)簽的常用工具酶，具有很強(qiáng)的位點(diǎn)特異性，嚴(yán)格識(shí)別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點(diǎn)在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。普遍應(yīng)用的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃時(shí)可達(dá)到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和溫度4-30℃的廣泛范圍內(nèi)皆有活性（見表1），使得反應(yīng)條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而靈活變動(dòng)。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His標(biāo)簽，通過Ni-NTA樹脂去除，以達(dá)到純化目的蛋白的目的。

2.產(chǎn)品來源：

大腸桿菌表達(dá)

3.純度：

經(jīng)SDS-PAGE及HPLC分析，純度> 95%

4.緩沖液組分：

50 mM Tris，pH 8.0，0.5 mM EDTA，1 mM DTT

5.比活性：

5U/ul

6.酶活定義：

在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.5 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反應(yīng)1 h，剪切>85%的3?μg底物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。

7.使用方法：

1）.取適量rTEV Buffer 2（1000×）作10倍稀釋至rTEV Buffer 2（100×）。

2）.在EP管中配制如下反應(yīng)體系。

組分

用量

融合蛋白

20?μg

rTEV Protease (5 U/μL)

2-4?μL

rTEV buffer 1（20×）

7.5?μL

rTEV Buffer 2（100×）a

1.5?μL

DDW（超純水）

up to 150?μL

3）.30℃孵育，在1、2、4、6小時(shí)分別吸出30?μL上述反應(yīng)液，置于單獨(dú)的EP管中。

4）.向上述EP管中加入30?μL 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。
5）.樣品全部反應(yīng)完畢后，樣品煮沸5 min，取40?μL進(jìn)行SDS-PAGE分析。確定最佳反應(yīng)時(shí)間。如融合蛋白要求低溫處理，可將反應(yīng)液置于4℃，延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，并增加rTEV酶用量，以保證酶切效果。

注意事項(xiàng)
1）.影響天然TEV酶活性的常見因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），Pestatin A（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），而rTEV可兼容上述抑制劑；2）Zn離子濃度（>5 mM），同樣對(duì)rTEV活性有抑制；3）與半胱氨酸反應(yīng)的試劑，也是rTEV的潛在抑制劑。
2）.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

*本試劑僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用