細(xì)胞系培養(yǎng)|原代細(xì)胞培養(yǎng)|細(xì)胞培養(yǎng)實驗設(shè)計|細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)
細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下,通過DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進(jìn)行的分裂系列過程。
對細(xì)胞的增殖進(jìn)行檢測,是一種對生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗,以及腫瘤放射敏感性測定等,不可或缺的實驗手段。目前主要有兩種方式檢測細(xì)胞增殖能力的方法:一種是直接的方法,通過直接測定進(jìn)行分裂的細(xì)胞數(shù)來評價細(xì)胞的增殖能力。例如:BrdU細(xì)胞增殖檢測;EdU細(xì)胞增殖檢測。另一種是間接的方法,即細(xì)胞活力檢測方法,通過檢測樣品中健康細(xì)胞數(shù)目來評價細(xì)胞的增殖能力。例如:MTT法、CCK8試劑盒法以及CTG法。
CTG法
ATP腺嘌呤核苷三磷酸(簡稱三磷酸腺苷)參與生物體內(nèi)多種酶促反應(yīng),是活細(xì)胞新陳代謝的一個指標(biāo),其含量直接反應(yīng)了細(xì)胞的數(shù)量及細(xì)胞狀態(tài):實驗過程中向細(xì)胞培養(yǎng)基加入CellTiter-Glo試劑,利用外源的螢火蟲熒光素與熒光素蛋白,以細(xì)胞內(nèi)的ATP作為能量來源 消耗ATP發(fā)出熒光,測量發(fā)光值,在光信號和體系中,發(fā)光值與ATP量成正比,而且CTG 發(fā)光法通過 ATP 含量來進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)或活力測定不受化合物自發(fā)熒光的影響。同普通的MTT和CCK8相比,CTG法具有反應(yīng)靈敏、反應(yīng)快以及能持續(xù)較長的信號持續(xù)時間等優(yōu)點,是細(xì)胞增殖測定,細(xì)胞活力測定和細(xì)胞毒性高通量篩選分析的理想選擇。
