植物全量鈣、鎂測定樣品的分解，可用干灰化法和濕灰化法。濕灰化法，如果采用HNO3—HClO4—H2SO4三酸消煮法，并且同時測定磷、鉀時要注意鎂和鈣轉(zhuǎn)化為難溶的CaSO4，而且SO?2?濃度太高時，對EDTA配合滴定或原子吸收分光光度法測定鈣都會帶來影響。因此，鈣、鎂的測定，以采用干灰化法為好。也可采用1mol·L~/HCl浸提法測定鈣、鎂和微量元素。

溶液中鈣、鎂的測定，目前都用EDTA配合滴定法或原子吸收分光光度法。

植物樣品中含磷量比較高，特別是種子中含磷很高而鈣、鎂較少，因此，在測定全鈣、鎂時必須考慮解決磷的干擾問題。而用原子吸收分光光度法測定鈣、鎂是一個快速而準(zhǔn)確的方法，應(yīng)用得比較普遍。

?一、EDTA配合滴定法

?方法原理

植物樣品經(jīng)干灰化后用稀鹽酸煮沸，溶解灰分中的鈣和鎂。待測溶液中Ca2+和Mg2+用EDTA直接滴定法測定。對含磷較高的植物種子樣品則須用EDTA反滴定法，以免在堿性溶液中生成磷酸鈣而造成負(fù)誤差。

?主要儀器 ： 馬福爐、瓷坩鍋（30mL）、半微量滴定管。

?試劑

（1）三乙醇胺（1∶1）溶液。

（2）4mol·L-1NaOH溶液。稱氫氧化鈉（化學(xué)純）16.0g溶于100mL水中。

（3）0.01 mol·L-1 EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液。取EDTA二鈉鹽3.720g溶于無二氧化碳水中，微熱溶解，冷卻后定容為1L。用標(biāo)準(zhǔn)Ca2*溶液標(biāo)定，方法同測定Ca2+。溶液貯于塑料瓶中。

（4）標(biāo)準(zhǔn)Ca2+溶液。準(zhǔn)確稱取在105℃下烘干4～6h的CaCO（分析純）0.5004g溶于0.5mol·L '鹽酸溶液25mL中，煮沸除去二氧化碳，瓶用無二氧化碳水洗入500mL容量瓶中，定容。該溶液的濃度為0.01mol·L-1（Ca2*）。

（5）氨緩沖溶液（pH=10）。取NHCl溶于200mL水中加入濃氨水（化學(xué)純）570mL，用水稀釋至1L，貯于塑料瓶中，并注意防止吸收空氣中的二氧化碳。

（6）K-B指示劑。先取KSO（無水）研細，再分別取酸性鉻黑K 【2-（2-羥基-5-磺酸鈉-偶氮苯）-1，8-二羥基-3，6萘二磺酸鈉鹽0.5g和1g萘酚綠B研細，將三者混勻，貯于塑料瓶中，不用時放在干燥器中保存。

?操作步驟??

進行灰化，冷卻后用少量水濕潤灰分，然后小心滴加HCl約20mL，慎防灰分飛濺損失，加熱至沸以溶解殘渣。用熱水將其無損地洗入100mL容量瓶中，冷卻后定容過濾，濾液備用。

（1）直接滴定法（適用于一般莖葉樣品）。

鈣的測定吸收上述待測液10mL（含鈣1～5mg），放入150mL三角瓶中，用水稀釋至50mL，加入1∶1三乙醇胺2mL，搖勻，再加4mol·L NaOH2mL，搖勻放置2min待Mg（OH）2沉淀后立即加入K-B指示劑0.1~0.2g，用0.01mol·L-|EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至紫紅色突變?yōu)樗{綠色為終點。

鈣+鎂總量的測定∶另取上述待測液10mL（含鈣1~5mg），放入150mL三角瓶中，用水稀釋至50mL，加入1∶1三乙醇胺2mL，搖勻，再加氨緩沖液5mL，搖勻。加入K-B指示劑0.1~0.2g，用0.01mol·L-'EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至紫紅色突變?yōu)樗{綠色為終點。

結(jié)果計算Ⅰ

（2）反滴定法（適用于一般種子樣品）

鈣的測定吸收上述待測液10mL（含鈣1～5mg），放入150mL三角瓶中，用水稀釋至50mL，加入1∶1三乙醇胺2mL，搖勻，再加4mol·L NaOH2mL，搖勻放置2min待Mg（OH）；沉淀后立即加入K—B指示劑0.1～0.2g，加入0.01mol·L-'EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液10mL，此時溶液呈藍色，然后用0.01mol·L-1Ca標(biāo)準(zhǔn)溶液反滴定過剩的EDTA，終點為藍綠色突變?yōu)樽霞t色。

同時做鈣空白標(biāo)定∶吸取空白液10mL（即1.2mol·L HCl約20mL的稀釋液）同上步驟進行滴定。

鈣+鎂總量的測定另取上述待測液10mL（約含鈣1～5mg），放入150mL三角瓶中，用水稀釋至50mL，加入1∶1三乙醇胺2mL，搖勻，再加氨緩沖液5mL，搖勻。加入K-B指示劑0.1~0.2g，加入0.01mol·L-LEDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液10mL，此時溶液呈藍色，然后用0.01mol·L-1Ca標(biāo)準(zhǔn)溶液反滴定過剩的EDTA，終點為藍綠色突變?yōu)樽霞t色。

同時做鈣+鎂空白標(biāo)定∶吸取空白液10mL（即1.2mol·L-'HCl約20mL 的稀釋液）同上步驟進行滴定。

結(jié)果計算Ⅱ

二、原子吸收分光光度法（AAS法）

?方法原理??

鈣鎂是原子吸收經(jīng)常測定的元素?？捎肁AS測定。

?主要儀器：原子吸收分光光度計，火焰光度計

試劑

（1）100μg*mL-1鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）10μg*mL-'鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（3）50gL-1氯化鍶或氯化鑭溶液。

?操作步驟

吸取中經(jīng)過濾待測液2～10mL（含鈣0.1～0.5mg，鎂0.01～0.05mg）于50mL容量瓶中，加入50g·L~l氯化鍶或氯化鑭溶液1mL（**）。水定容后用原子吸收分光光度計分別測定鈣和鎂的含量。其測定條件請查閱儀器說明書。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。分別吸取100μg·L |丨鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液和10μg·mL~'鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1、2、3、4、5mL，分別將其至于6個50mL三角瓶中，然后吸取待測溶液相同體積的空白酸液（即1.2mol·L-1HCl約20mL的稀釋液）（性2），再各加入50g·L二】氯化鍶或氯化鑭溶液1mL，水定容，即得0、2、4、6、8、10μg ·mL-1Ca和0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg·mL-1Mg混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。用原子吸收分光光度計測定。繪制鈣和鎂的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

?結(jié)果計算

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注釋

注1.空氣/乙炔火焰中測定鈣，它是受多種化學(xué)干擾的典型。其中的主要干擾物質(zhì)為硅酸鹽、鋁酸鹽、磷酸鹽和硫酸鹽，它們都會降低鈣的靈敏度。在樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入50μg·L=1的La（鑭）或Sr（鍶），其最終濃度為1000μg·mL-1，就能控制高達500μg·mL-'硅和1000g-mL-'鋁或磷酸鹽的影響。鎂一般受其它元素的干擾，僅有硅和鋁降低鎂的吸收，加入1～10g·L-1 La，一般就可以消除這此干擾。

注2.溶解時用酸量對鈣和鎂的測定也有影響，應(yīng)盡量保持標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液的酸濃度和離子組成一致。

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