什么是免疫組化

免疫組化是基于免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量研究。免疫組化具有特異性強(qiáng)、敏感性高、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合等多種優(yōu)點(diǎn)。免疫組化可應(yīng)用于確定細(xì)胞類(lèi)型、發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶、了解分化程度?、臨床應(yīng)用、腫瘤起源與分化 、指導(dǎo)治療與預(yù)后等多個(gè)方面。

根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色的原理，組織切片或細(xì)胞樣本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與生物素、熒光素等標(biāo)記的二抗反應(yīng)，當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中熒光素受到激發(fā)光照射后會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而進(jìn)行顯色分析。?

怎么選擇抗體

抗體的選擇是我們?cè)谧雒庖呓M化過(guò)程中很重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。其中，我們常用到的抗體包括單克隆抗體和多克隆抗體，多克隆抗體是指多株B細(xì)胞針對(duì)多個(gè)抗原決定簇產(chǎn)生的抗體，單克隆抗體則是針對(duì)某一抗原決定簇，由單株淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生的抗體。多克隆抗體靈敏度較高，但抗體特異性較差，極易出現(xiàn)背景及非特異性染色。而單克隆抗體則擁有較強(qiáng)的特異性。?

?實(shí) 驗(yàn) 標(biāo) 本?

免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的標(biāo)本分為組織和細(xì)胞標(biāo)本，組織標(biāo)本分別有石蠟切片和冰凍切片兩種，冰凍切片可以保持組織抗原及活性完整，抗體結(jié)合效果好，但不足是組織結(jié)構(gòu)及圖片效果不佳；石蠟切片易于存放，圖片效果較好且可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，但與冰凍切片相比其抗體結(jié)果效果略差。?

常 用 方 法?

下面為您送上石蠟切片制作流程，請(qǐng)根據(jù)您的個(gè)人需求進(jìn)行調(diào)整石蠟切片的制作

①.固定：4%多聚甲醛

②.脫水：50%乙醇，70%乙醇1d，80%乙醇過(guò)夜，95%乙醇3h，無(wú)水乙醇2h

③.透明：50%二甲苯45min，100%二甲苯30min

④.包埋：恒溫箱內(nèi)浸入石蠟45min

⑤.切片：5-7μm⑥.貼片：溫水中放置舒展⑦.烤片 ：55°C過(guò)夜

我們還為大家整理了常見(jiàn)問(wèn)題以及解決方法，若你還有脫片、背景深的實(shí)驗(yàn)問(wèn)題，可以繼續(xù)關(guān)注我們哦！?

作者：海星生物? ? ? ?

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