艾美捷總膠原蛋白檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理和應(yīng)用
QuickZyme?總膠原蛋白檢測(cè)試劑盒基于通過(guò)酸水解膠原蛋白獲得的羥脯氨酸殘基的定量比色測(cè)定。通常對(duì)于這種水解分析需要去除?HCl,這是一個(gè)耗時(shí)的步驟和/或需要特殊設(shè)備。
?
QuickZyme Total Collagen?測(cè)定是唯1一種不需要這個(gè)費(fèi)力步驟的基于羥脯氨酸的測(cè)定,從而在水解步驟后進(jìn)行快速(<2?小時(shí))和簡(jiǎn)單(96?孔板格式)的測(cè)定。
?
膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分之一。膠原蛋白生成的失調(diào)會(huì)導(dǎo)致諸如纖維化(膠原蛋白過(guò)多)或骨關(guān)節(jié)炎(膠原蛋白太少)等疾病。因此,膠原蛋白生成的測(cè)量在許多與疾病相關(guān)的研究中都很重要。
?
艾美捷?總膠原蛋白檢測(cè)試劑盒是基于對(duì)羥脯氨酸的檢測(cè)。羥脯氨酸是一種非蛋白氨基酸,在哺乳動(dòng)物中存在于彈性蛋白和膠原蛋白中。它的存在主要限于膠原蛋白的三螺旋,其中它的存在增加了三螺旋的穩(wěn)定性。羥脯氨酸是通過(guò)脯氨酸羥化酶的作用從特定的脯氨酸殘基翻譯后形成的。組織水解物中的羥脯氨酸可用作膠原蛋白含量的直接量度。
?

?
通過(guò)在?95°C?下在?6M HCl?中完全水解組織樣品來(lái)開(kāi)始測(cè)量膠原蛋白。使用?Prockop?和?Udenfriend (Anal. Biochem., 1960, 1: 228-239)?描述的方法的改進(jìn)對(duì)水解產(chǎn)物中的羥脯氨酸殘基進(jìn)行定量。該測(cè)定法測(cè)量樣品中存在的羥脯氨酸的總量,它代表樣品中存在的所有類(lèi)型的膠原蛋白,而不區(qū)分膠原蛋白的類(lèi)型以及前膠原蛋白、成熟膠原蛋白和膠原蛋白降解產(chǎn)物。
?
該測(cè)定很簡(jiǎn)單,產(chǎn)生的色原在?570 nm?處具有最大吸光度。該測(cè)定法的開(kāi)發(fā)方式使其不需要酸水解后的干燥步驟,而酸水解通常需要特殊設(shè)備。
?
艾美捷?總膠原蛋白檢測(cè)試劑盒化學(xué)性質(zhì):
應(yīng)用:組織、細(xì)胞提取物、組織勻漿
樣品要求:50 - 500?微升
船運(yùn):在環(huán)境溫度下。收到后,將產(chǎn)品存放在以下推薦的溫度下。
存儲(chǔ)/到期:未開(kāi)封的試劑盒:在室溫?(RT)?下避光保存。請(qǐng)勿使用超過(guò)套件有效期的套件組件。
打開(kāi)的試劑盒:重組試劑:打開(kāi)的膠原蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)緩沖液應(yīng)避光儲(chǔ)存在?4°C。其他打開(kāi)的試劑應(yīng)在室溫下避光儲(chǔ)存,并穩(wěn)定至少?1?個(gè)月。復(fù)溶的檢測(cè)試劑(A+B)應(yīng)在復(fù)溶當(dāng)天使用。
校準(zhǔn)范圍:0 - 300?微克/毫升
檢測(cè)限:2.5?微克/毫升
?
艾美捷?總膠原蛋白檢測(cè)試劑盒參考文獻(xiàn):
Ricard-Blum S. The collagen family. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2011 Jan 1;3(1):a004978. doi: 10.1101/cshperspect.a004978. PMID: 21421911; PMCID: PMC3003457.