單細胞轉(zhuǎn)錄組測序在解決組織異質(zhì)性方面有極大優(yōu)勢，其研究范圍和規(guī)模擴大的同時，也在樣本準備和實驗操作等方面面臨許多新的挑戰(zhàn)。為解決這些難題，博奧晶典引進了 Fixed RNA（RNA 固定）技術(shù)。該技術(shù)使用多聚甲醛（Paraformaldehyde，PFA）固定組織或細胞懸液，可以在不犧牲完整性或數(shù)據(jù)質(zhì)量的情況下，安全地存儲和運輸樣本；此外，利用 Fixed RNA 技術(shù)還可實現(xiàn)穩(wěn)定的混樣測序，一次性分析數(shù)十萬個固定的單細胞，從而為樣本獲取、管理和處理提供了高效而簡化的工作流程，也為通量提高和批量分析創(chuàng)造了新的可能。值得注意的是，F(xiàn)ixed RNA 技術(shù)還實現(xiàn)了 FFPE 樣本在單細胞水平的研究，可以解鎖大量儲存在醫(yī)院以及生物樣本庫中的 FFPE 樣本的寶貴信息。

什么是 Fixed RNA？

Fixed RNA?是采用?4%?多聚甲醛鎖定細胞表達狀態(tài)，通過探針雜交的方式捕獲靶基因，再進行細胞捕獲建庫測序的新技術(shù)。該技術(shù)解決了脆弱細胞破譯、樣本儲存運輸、及多樣本批量測序等難題，為單細胞轉(zhuǎn)錄組的研究提供便利。

Fixed RNA 的工作流程是怎樣的？

組織或細胞懸液樣本經(jīng)多聚甲醛固定后，將樣本與探針組雜交，使用 Fixed RNA 專用芯片，單個通道可運行一個樣本（單樣分析流程），或單個通道中混合多個樣本（混樣分析流程）。制備單細胞測序文庫進行測序，然后使用 10x Genomics 的 Cell Ranger 和 Loupe Browser 軟件工具進行分析。

Fixed RNA 有哪些技術(shù)優(yōu)勢？

1)保留細胞狀態(tài)，突破樣本限制固定可鎖定生物學(xué)狀態(tài)，并保存脆弱或快速變化的細胞。
2)方便實驗規(guī)劃安排可以在不折損數(shù)據(jù)質(zhì)量的情況下存儲樣本，消除時間限制，避免批次效應(yīng)，減少實驗可變性。
3)高靈敏度，數(shù)據(jù)表現(xiàn)優(yōu)良采用探針雜交的方式捕獲基因，具備單細胞分辨率和高靈敏度，有效數(shù)據(jù)量、基因表達量及分群結(jié)果等與常規(guī)單細胞轉(zhuǎn)錄組表現(xiàn)一致，且可提高低表達基因的檢出率。
4)擴大研究規(guī)模降低成本單個通道中可混合多個樣本，批量分析、混樣處理樣本可實現(xiàn)便捷的工作流程、節(jié)約成本，效率最大化。

Fixed RNA 技術(shù)可以解決哪些問題？

1)取樣后需要確定病理以后再決定該樣本要不要入組樣本需先確定病例分型（如H&E染色、免疫組化等），再根據(jù)具體規(guī)劃確定是否開展單細胞實驗。
2)樣本本身細胞狀態(tài)脆弱或轉(zhuǎn)錄本易降解將研究對象擴展到脆弱或瀕死細胞樣本，以及細胞狀態(tài)短期快速變化，因治療或擾動而迅速變化，需要研究其變化趨勢等，可快速鎖定細胞狀態(tài)。
3)需要多地點取樣，或長距離運輸樣本實驗需要多中心合作，或者需從不同地點采樣、長距離運輸樣本等。
4)介意不同批次實驗，產(chǎn)生批次效應(yīng)影響結(jié)果生產(chǎn)批次效應(yīng)無法通過分析層面去除，通過樣本的批量處理和混樣分析，減少實驗可變性并提高效率。
5)需要大樣本量、大細胞量，考慮混樣測序，但實驗成本依然很高大規(guī)模研究、隊列多中心研究，對樣本采集、保存和批量處理有需求，在不折損數(shù)據(jù)質(zhì)量的情況下保存樣本，在同一次運行中混樣測序、批量分析，降低成本。

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