自1975年Kohler和Milstein首次描述通過雜交瘤技術產(chǎn)生單克隆抗體(mab)的方法以來，單克隆抗體已成為必不可少的研究試劑和非常成功的治療分子。由于疾病靶標在物種間的高序列保守性(使免疫變得困難)、受限的解剖位置(例如中樞神經(jīng)系統(tǒng))、難以純化可溶性形式(例如gpcr)以及有時需要靶向疾病狀態(tài)特異性的瞬時或不穩(wěn)定構象，因此通過抗體干預來調(diào)節(jié)疾病靶標變得更具挑戰(zhàn)性。

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盡管雜交瘤方法已經(jīng)徹底改變了單克隆抗體的使用，但由于依賴于融合事件，該技術相對低效。噬菌體展示技術也被廣泛用作生產(chǎn)單克隆抗體的技術。然而，在文庫構建過程中發(fā)生的抗體可變區(qū)基因的隨機組合導致天然同源重鏈和輕鏈配對的丟失，而這些重鏈和輕鏈配對是在體內(nèi)免疫應答過程中進化和選擇的。由于這種隨機配對，來自抗體文庫的抗體通常需要體外成熟，以在作為治療分子進展之前賦予增加的親和力和穩(wěn)定性。

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近年來單B細胞技術獲得了許多科學家的青睞，單B細胞技術平臺保留了自然的重鏈和輕鏈配對，避免了低效的雜交瘤融合步驟，從而能夠有效地挖掘免疫B細胞群。這有助于發(fā)現(xiàn)罕見的抗體，這些抗體可能具有獨特的高度理想的特性，以及產(chǎn)生大量不同的抗體。在克隆抗體基因的過程中，保留天然的重鏈和輕鏈配對有利于產(chǎn)生具有吸引力的親和力、特異性和穩(wěn)定性的重組抗體。

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流式細胞術已被用于從免疫、接種疫苗或感染后7天的獻血者血液中分離出單個漿母細胞。在此期間，質(zhì)母細胞短暫地出現(xiàn)在外周，并提供豐富的抗原特異性B細胞群供選擇。然而，分選不包括抗原結合步驟，盡管群體豐富，但從這些漿質(zhì)母細胞中回收抗原特異性重組抗體的比例可低至10%。

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在相關的文獻研究中，除了Manz等人以及最近的Carroll和al - rubeai[20]和Taddeo等人的研究外，流式細胞術尚未常規(guī)應用于抗原反應性IgG分泌細胞的鑒定。這主要是由于缺乏表面免疫球蛋白，排除了用靶抗原染色特定細胞的選擇。然而，F(xiàn)ACS已被成功用于鑒定抗原特異性記憶B細胞，表達表面IgG作為B細胞受體的一部分。Weitkamp等(2003)利用熒光病毒樣顆粒(VLPs)在96孔板上鑒定并將輪狀病毒特異性的人單B細胞分選到單孔中，然后進行培養(yǎng)，誘導抗體分泌。Amanna和Slifka設計了一種FACS方法，用于臨床樣本中破傷風和白喉抗原特異性記憶B細胞的鑒定和定量。然而，他們沒有將其擴展到單細胞分選和進一步分析。di Niro等人描述了輪狀病毒特異性B細胞分選后立即進行單細胞RT-PCR。

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普健生物（我們）建立了噬菌體展示抗體文庫技術平臺以及新型的 Xten??Mab?Single?B 兔單克隆抗體開發(fā)技術平臺。利用B細胞分選富集策略，在流式分選設備的支持下，有效富集抗原特異性B細胞，提高B細胞體外培養(yǎng)的成活率，保留B細胞的多樣性，可開發(fā)出不同應用需求的抗體。這些抗體具有多重優(yōu)勢：

高特異性：與小鼠和其他嚙齒動物相比，兔免疫系統(tǒng)更優(yōu)秀，產(chǎn)生的抗體特異性更強，親和力更高

高穩(wěn)定性：與常規(guī)小鼠生產(chǎn)的單克隆抗體相比，兔IgG結構穩(wěn)定性高

高親和力：兔的B細胞成熟過程產(chǎn)生的親和力是嚙齒動物的10-100倍

高多樣性：兔擁有豐富的B細胞反應庫，其產(chǎn)生的抗體在表位變異、突變、構象變化等方面優(yōu)勢顯著，且多樣性高

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單B細胞篩選策略避免了雜交瘤融合和組合展示，已成為高效采集免疫動物和人天然抗體庫的重要技術。使用一系列方法檢測不同B細胞亞群是一種有吸引力的選擇，可確保產(chǎn)生大量和多樣化的高質(zhì)量抗體組合。多種抗體的產(chǎn)生以及發(fā)現(xiàn)罕見的具有獨特和理想特征的產(chǎn)生IgG的B細胞克隆的能力，有助于鑒定適合目的的分子，并可開發(fā)成治療藥物或研究試劑。

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