Assay?Genie?細(xì)胞因子風(fēng)暴多重面板?9-plex：

名稱：?細(xì)胞因子風(fēng)暴多重組合?9?重

編號(hào)：?HUAMCOV05

反應(yīng)：?人

分析物：?IL-6、IL-10、IFN-γ、CCL2/SYCA2/MCP-1、GM-CSF/CSF-2、TNF-α、IL-1β、IL-2?和?IL-8/CXCL8

樣品類型：?細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、體液和組織/細(xì)胞裂解物

檢測(cè)類型：?多重

檢測(cè)方法：?流式細(xì)胞術(shù)

檢測(cè)時(shí)間：?2小時(shí)

?

艾美捷Assay?Genie?細(xì)胞因子風(fēng)暴多重面板?9-plex：

緩沖區(qū)：?2x NR dAb稀釋劑。一個(gè)裝有?1.5 mL?生物素檢測(cè)抗體稀釋劑的小瓶

凍干標(biāo)準(zhǔn)混合物：?人?COVID-19?多重細(xì)胞因子免疫測(cè)定。一個(gè)含有凍干重組IL-6、IL-10、IFN-γ、CCL2/SYCA2/MCP-1、GM-CSF/CSF-2、TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-8/CXCL8的小瓶

標(biāo)準(zhǔn)劑量回收率：?70-130%

檢測(cè)內(nèi)簡(jiǎn)歷：?<10%

檢測(cè)間簡(jiǎn)歷：?<20%

面板中分析物的交叉反應(yīng)性：?微不足道

樣品量：?15?μL/測(cè)試

?

Assay?Genie?細(xì)胞因子風(fēng)暴多重面板?9-plex協(xié)議：

1.?準(zhǔn)備濾板模板。標(biāo)記標(biāo)準(zhǔn)孔、樣品孔和空白孔。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品應(yīng)一式兩份或一式三份運(yùn)行。如果整個(gè)板不使用，請(qǐng)用板密封密封未使用的井。

重要提示：在整個(gè)測(cè)定過程中將濾板放在濾板蓋的頂部，以防止在任何表面上接觸板底。

2.?渦旋工作珠懸浮15秒。

3.?向每個(gè)孔中加入?45?μL?捕獲珠工作懸浮液。

注意：保存剩余的捕獲珠工作懸浮液，并在2-8°C下儲(chǔ)存，并有光保護(hù)。它可用于在流式細(xì)胞儀上設(shè)置采集參數(shù)。

4.?使用連接到真空源的“流通式”濾板清洗機(jī)去除孔中的緩沖液，該真空源已根據(jù)濾板清洗機(jī)說明進(jìn)行調(diào)整。

5.?使用連接到真空源的“流通式”濾板清洗機(jī)去除孔中的緩沖液，該真空源已根據(jù)濾板清洗機(jī)說明進(jìn)行調(diào)整。

6.?向每個(gè)樣品孔中加入?30?μL CCS、SPB?或?TL?檢測(cè)緩沖液。

注意：如果預(yù)計(jì)細(xì)胞因子水平非常低（小于20 pg/mL），則可以在不稀釋分析緩沖液的情況下運(yùn)行細(xì)胞培養(yǎng)上清液樣品。如果是這種情況，請(qǐng)?zhí)^此步驟，在步驟?45?中向每個(gè)樣品孔中加入?7?μL?細(xì)胞培養(yǎng)上清液樣品。

7.?向每個(gè)樣品孔中加入?15?μL?樣品。向每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入?45?μL?標(biāo)準(zhǔn)品。用板密封蓋住板。

8.?在室溫下在搖床（設(shè)置為700rpm）上孵育60分鐘。用鋁箔包裹濾板避光。

9.?取下板封。使用連接到真空源的過濾板清洗機(jī)去除孔中的溶液。

10.?使用連接到真空源的過濾板清洗機(jī)去除孔中的溶液。

11.?使用濾板清洗機(jī)用100μL 1x洗滌緩沖液洗滌孔三次。

12.?在最后一次洗滌后，將板底輕輕敲打在幾層紙巾上，以去除板底殘留的緩沖液。

13.?向每個(gè)孔中加入?25μL?生物素化抗體工作溶液。用板密封蓋住板。

14.?在室溫下在搖床（設(shè)置為700rpm）上孵育30分鐘。用鋁箔包裹濾板避光。

15.?取下板封。使用濾板清洗機(jī)去除孔中的溶液。使用濾板清洗器用?100?μL 1x?洗滌緩沖液洗滌孔?<>?次。

16.?在最后一次洗滌后，將板底輕輕敲打在幾層紙巾上，以去除板底殘留的緩沖液。

17.?向每個(gè)孔中加入?25μL?鏈霉親和素-PE?工作溶液。用板密封蓋住板。

18.?在室溫下在搖床（設(shè)置為700rpm）上孵育20分鐘。用鋁箔包裹濾板避光。

19.?取下板封。使用濾板清洗機(jī)去除孔中的溶液。用?100?μL 1x?洗滌緩沖液洗滌孔兩次。

20.?將板底輕輕敲打在幾層紙巾上以去除殘留溶液。根據(jù)流式細(xì)胞儀的樣品加載機(jī)制，向每個(gè)孔中加入?150μL?至?300μL 1x?讀數(shù)緩沖液，以重新懸浮磁珠。用板密封蓋住板。

21.?將板放在微量滴定振蕩器上，以30rpm搖動(dòng)700秒。

注意：如果流式細(xì)胞儀沒有?96?孔板加載器，并且需要超過?200?μL?的?1x?讀數(shù)緩沖液來重新懸浮磁珠，請(qǐng)不要搖動(dòng)板。用P6移液器上下移液8至200次，將磁珠重新懸浮在每個(gè)孔中，然后轉(zhuǎn)移到試管中進(jìn)行采集。取下板封。在流式細(xì)胞儀上讀取。

?

Assay Genie旗下涵蓋了15種種屬的高品質(zhì)的ELISA試劑盒及多種抗體，可檢測(cè)的指標(biāo)種類豐富，覆蓋免疫、代謝和分子等多種研究領(lǐng)域，是科學(xué)研究中便捷的小助手。艾美捷科技是Assay Genie的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。