ROC-325 是一種有效的具有口服活性的自噬 （autophagy） 抑制劑，具有很強的抗癌活性。ROC-325 引起溶酶體脫酸，自噬體積累和自噬通量中斷。ROC-325 還誘導腎細胞癌凋亡 （apoptosis）。

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　　生物活性

　　體外研究

　　ROC-325以atg5 /7依賴的方式拮抗腎細胞癌（RCC）的生長和存活，誘導細胞凋亡，并表現(xiàn)出良好的選擇性。ROC-325對A498、A549、CFPAC-1、COLO-205、dlc -1、ig羅夫-1、MCF-7、MiaPaCa-2、NCI-H69、PC-3、RL和UACC-62細胞的IC50分別為4.9 μM、11 μM、4.6 μM、5.4 μM、7.4 μM、11 μM、11 μM、5.8 μM、5.0 μM、11 μM、8.4 μM和6.0 μM。ROC-325誘導自噬抑制的標志性特征并拮抗自噬通量。

　　ROC-325引發(fā)組織蛋白酶D （CTSD）水平的顯著升高。5 μM ROC-325處理24小時可導致A498和786-0 RCC細胞中LC3B點的形成和LC3B水平的顯著增加。在A498和786-0細胞中進行的免疫印跡分析表明，ROC-325促進LC3B表達的劑量依賴性增加，其方式與p62和組織蛋白酶D水平的相應(yīng)增加相關(guān)。

　　MCE尚未獨立證實這些方法的準確性。僅供參考。

　　體內(nèi)研究

　　口服ROC-325 （25 mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg）給786-0 RCC異種移植物小鼠耐受性良好，在抑制腫瘤進展方面明顯比羥氯喹更有效，并能抑制體內(nèi)自噬。

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　　實驗參考方法

　　激酶試驗

　　用ROC-325孵育腎癌細胞24小時。細胞被收獲，然后被溶解。從每個樣品中提取約50 μg的細胞總蛋白進行SDS-PAGE，將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝化纖維素膜上，并用5%脫脂乳在含有0.1% Tween-20的tris緩沖鹽水溶液中阻斷膜1小時。然后用一抗在4°C下探針過夜，洗滌，并用偶聯(lián)的種特異性二抗探針辣根過氧化物酶。免疫反應(yīng)性物質(zhì)通過增強化學發(fā)光檢測。

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　　細胞試驗

　　通過MTT法估計細胞活力。細胞被播種到96孔的微培養(yǎng)皿中，每孔10000個細胞，并允許附著24小時。然后用ROC-325處理細胞72小時。ROC-325處理后，加入MTT，用酶標儀定量甲醛吸光度。通過將各自的甲醛光密度歸一化到對照細胞的密度，計算每個實驗條件下估計的細胞活力。通過碘化丙啶（PI）染色和熒光活化細胞分選（FACS）分析亞g0 /G1 DNA含量，以及使用商業(yè)試劑盒流式細胞術(shù)測量活性caspase-3，定量分析ROC-325體外暴露后的促凋亡作用。ROC-325：https://www.activeinhibitor.com/yzj/1228.html

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　　動物實驗

　　786-0腎癌細胞（5×106）懸浮在HBSS和Matrigel的混合物中，皮下植入雌性裸鼠。每種細胞系異種移植的荷瘤動物被隨機分為治療組。小鼠用載藥（水）、ROC-325（25、40和50 mg/kg PO） QD×5治療6周。每天監(jiān)測小鼠，每周測量兩次腫瘤體積。在研究結(jié)束時，從每組有代表性的動物中切除腫瘤，用福爾馬林固定，石蠟包埋進行免疫組織化學分析。

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