這次讀的是一篇藥理+結(jié)構(gòu)的，大老板依然是孔煒。

CMap系統(tǒng)：基于全基因組表達(dá)譜的數(shù)據(jù)驅(qū)動(dòng)和系統(tǒng)的方法發(fā)現(xiàn)基因、化學(xué)物質(zhì)與疾病的關(guān)聯(lián)。相似的藥物可能具有相似的機(jī)制，治療相似的疾病。

Result1：Naringenin is a candidate compound for the treatment of AAA

將已整合入CMap的化合物進(jìn)行與強(qiáng)力霉素的相關(guān)性排序，在前十種中，天然存在的葡萄柚類黃酮柚皮素(NGN)與強(qiáng)力霉素呈顯著相關(guān)，并已被證實(shí)具有降脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗高血壓和抗炎特性?？紤]到高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化和血管炎癥在AAA28發(fā)病機(jī)制中的重要作用，假設(shè)柚皮素可能抑制AAA的形成。

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對(duì)橘皮素抑制AAA的效果進(jìn)行了簡(jiǎn)單的驗(yàn)證。分別是CaPO4和AngII的模型。

Result2：Naringenin reverses established AAAs

先建立AAA，然后再處理，為了判斷NGN會(huì)不會(huì)逆轉(zhuǎn)已建立的AAA

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超聲測(cè)量的腎上主動(dòng)脈直徑被柚皮素強(qiáng)烈抑制。離體測(cè)量腎上主動(dòng)脈最大直徑顯示，21只柚皮素處理小鼠中只有10只仍存在AAAs;其他小鼠的AAAs明顯減少。

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在CaPO4模型里又進(jìn)行了驗(yàn)證。

這一部分表明，柚皮素不僅可以阻止AAAs的形成，還可以延緩已形成的AAAs的進(jìn)展。

Result3：Naringeninactivates TFEB and lysosome biogenesis in macrophages

基因本體分析顯示，橘皮素反應(yīng)性基因中，上調(diào)的基因多與溶酶體相關(guān)。

在巨噬細(xì)胞中，橘皮素可以劑量依賴性地增加溶酶體的數(shù)量和降解能力。

RT-qPCR顯示，上調(diào)的溶酶體基因包括溶酶體膜蛋白(ATP6V1A等)和溶酶體酶(CTSB、CTSD等)

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柚皮素增加了巨噬細(xì)胞中LAMP1(溶酶體數(shù)量的標(biāo)志)，但降低了p62(自溶酶體降解活性的標(biāo)志)水平，這兩者共同表明誘導(dǎo)了自溶酶體的形成和降解。與這些發(fā)現(xiàn)一致，柚皮素促進(jìn)了自溶酶體的形成，mRFP-GFP串聯(lián)熒光標(biāo)記LC3 (tfLC3)實(shí)驗(yàn)證明了這一點(diǎn)。因此，柚皮素可以促進(jìn)溶酶體的生物發(fā)生和活性。

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接下來評(píng)估在體內(nèi)的效果。

橘皮素能增加AAA巨噬細(xì)胞中溶酶體數(shù)量。

在早期(7天)注入血管的ApoE?/?小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞中也觀察到溶酶體數(shù)量(通過LAMP1表達(dá)檢測(cè))和活性(通過p62降解檢測(cè))的減少，但這些參數(shù)通過柚皮素灌胃恢復(fù)。

溶酶體生物發(fā)生的調(diào)控由MiTF/TFE轉(zhuǎn)錄因子家族(MiTF、TFEB、TFE3和TFEC)和抑制因子zkscan33,34調(diào)控。

橘皮素可以劑量依賴性地上升TFEB的表達(dá)，但不影響TFE3表達(dá)。

磷酸化的TFEB與14-3-3蛋白相互作用，在細(xì)胞質(zhì)中保持無活性的狀態(tài)。在營養(yǎng)和能量應(yīng)激的情況下，TFEB被鈣調(diào)蛋白激酶去磷酸化，轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核，上調(diào)靶基因的表達(dá)，包括TFEB本身。

橘皮素可時(shí)間依賴性地促進(jìn)TFEB的核易位，而降低胞質(zhì)中的TFEB。但是橘皮素并沒有改變AKT和PKC的磷酸化水平，表面橘皮素對(duì)TFEB活化的影響并不依賴于AKT和PKC。

在體內(nèi)，TFEB能強(qiáng)烈上調(diào)AAA巨噬細(xì)胞中TFEB水平。

因此，柚皮素在體內(nèi)外均能刺激巨噬細(xì)胞中TFEB的表達(dá)/激活和溶酶體的生物生成。

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Result4：Naringenin inhibits and reverses AAA via macrophage TFEB

建立TFEB條件性敲除小鼠，對(duì)照組中NGN有治療效果，而敲除TFEB之后不再有治療效果。

接下來又是前面一部分的思路——AAA的建立與建立后的延緩作用。

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這一部分實(shí)質(zhì)上是對(duì)前面結(jié)論的雙向驗(yàn)證。柚皮素對(duì)已建立的AAAs的保護(hù)作用依賴于巨噬細(xì)胞TFEB。

Result5：Naringenin directly binds to 14-3-3 epsilon and inhibits the TFEB-14-3-3 interaction

篩選出14-3-3蛋白，為了確認(rèn)結(jié)合，進(jìn)行等溫滴定量熱法(ITC)、細(xì)胞熱移實(shí)驗(yàn)(CETSA)、等溫劑量-反應(yīng)指紋圖譜(ITDRFCETSA)

免疫共沉淀表明，柚皮素顯著抑制了TFEB和14-3-3ε的相互作用，但不抑制FOXO4（一種14-3-3ε已知配體）的結(jié)合。

Result6：Naringenin ameliorates AAA via TFEB-dependent inhibition of the NLRP3 inflammasome

柚皮素刺激或TFEB過表達(dá)抑制了血管內(nèi)皮素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞NLRP3炎性體的激活。應(yīng)用氯喹抑制溶酶體酸化消除了柚皮素對(duì)caspase-1激活和IL-1β分泌的抑制作用。

體外成熟caspase-1的western blotting分析和體內(nèi)血漿IL-1β的ELISA分析證明，TFEB敲除顯著阻斷柚皮素的作用。

這一部分表明，柚皮素和TFEB至少部分通過溶酶體依賴性抑制NLRP3炎性體來減弱AAA的形成。

Result6：Naringenin promotes TFEB-dependent macrophage M2 polarization

用一張圖總結(jié)一下，柚皮素與14-3-3結(jié)合后，釋放TFEB，TFEB入核，抑制NLRP3炎癥激活，誘導(dǎo)M2巨噬細(xì)胞極化，導(dǎo)致腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)生發(fā)展。

其實(shí)這篇讀的并不細(xì)，尤其是結(jié)構(gòu)部分幾乎沒看，有時(shí)間的原因，更多的是看不懂。。。

接下來的日子可能讀結(jié)構(gòu)比較多了。又或許還是心血管。。。

明天先看看吧qwq