基本信息

細胞名稱：小鼠脂肪間充質(zhì)干細胞

組織來源：小鼠脂肪組織

細胞形態(tài)：梭形

生長特性：貼壁生長

支原體：無

背景簡介：

脂肪間充質(zhì)干細胞（Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells, ADSCs）是來源于脂肪組織的干細胞，與其它成體干細胞一樣具有自我更新和多向分化的能力。人和鼠的脂肪組織均可用于分離ADSCs，其中鼠脂肪組織通常取自腹股溝處脂肪墊。

細胞形態(tài)

細胞特點

1、具有自我更新及多向分化的潛能

2、來源充足

3、對供區(qū)的創(chuàng)傷較小

4、獲得率及體外擴增速率高

材料準備

逸漠生物間充質(zhì)干細胞專用培養(yǎng)基

PBS溶液（IMC-401）

0.25%胰蛋白酶細胞消化液?（IMC-501）

脂肪干細胞組織分離液

實驗步驟

1. 3天齡到4周齡（推薦周齡?。┬∈?只，麻醉處死，75%乙醇浸泡消毒3-5min。無菌條件下切開腹股溝皮膚，暴露腹股溝脂肪墊。

2. 鈍性剝離脂肪組織，清洗并去除筋膜組織及小血管。將脂肪墊剪碎，轉(zhuǎn)移至15 mL離心管中。

3.加入3-4倍體積的脂肪干細胞組織分離液，37℃水浴振蕩約20 min，直至細胞混合物成乳狀濃稠液體。期間可吹打脂肪組織，輔助消化。

4.250×g，4℃，離心5min。注意離心機預冷至4℃。

5.小心吸去上層油脂，注意不要破壞位于下方的膠狀沉淀。加人5mL完全培養(yǎng)基，重懸沉淀，過40μM細胞篩到新的離心管中，再次離心5min。

6.重復洗滌一次，吸去上清。

7.加入8 mL完全培養(yǎng)基重懸沉淀，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，置于37℃，5%?二氧化碳培養(yǎng)箱中。

8.待細胞貼壁生長48h后首次觀察、換液。

9.換液時通過棄去培養(yǎng)基，從而去除未貼壁的細胞。

10.以后每兩天更換一次培養(yǎng)基，細胞匯合達80%-90%時，0.25%胰蛋白酶消化，按1:2或1:3比例首次傳代。

注意事項！

1. 全程無菌操作，小鼠要提前酒精浸泡防止污染，仔細剝離去除血管和筋膜組織。

2. 脂肪組織在剪碎的過程中不能研磨，以免破壞細胞。

3. 小鼠皮下脂肪前體細胞隨著小鼠周齡增大，誘導分化潛能逐漸下降，故建議選擇4周內(nèi)小鼠進行實驗。

4. 剪開皮膚的剪刀需與取材的剪刀相區(qū)分，避免污染。

5. 需要的膠原酶量和消化時間需要根據(jù)具體情況相應增減。如果消化已經(jīng)完全，未見明顯組織則可停?消化。

6. 消化完后的組織在離心前把離心機預冷，脂肪原代細胞在低溫既可保持良好的活力，又能便于細胞更好的與油脂分離

鑒定

1. 形態(tài)學觀察

原代培養(yǎng)后，傳代2-3次，ADSCs呈現(xiàn)單層，梭狀或多枝狀的細胞形態(tài)，其直徑在25-30um，待細胞達到匯合時，它們形態(tài)上呈紡錘形，類似于成纖維細胞，貼壁較牢固。

2. 標記物檢測

一般的標準為CD29、CD44、CD73、CD105為陽性（>70%）；CD34、CD45、CD11b為陰性（<5%）。

3. 誘導分化實驗

在特定的誘導條件下，脂肪間充質(zhì)干細胞可以分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、神經(jīng)細胞、上皮細胞、心肌細胞等多種細胞。

不同代系免疫表型

三系分化鑒定

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