M13噬菌體-重組DNA技術(shù)
M13 噬菌體是一種細(xì)菌病毒,由被各種主要和次要外殼蛋白包裹的單鏈 DNA 組成。 M-13 的基因組僅比 λ 載體小 6407 個(gè)核苷酸。
1. 為絲狀相,由單鏈環(huán)狀DNA分子組成。 M-13的基因組僅比λ載體小6407個(gè)核苷酸,這是因?yàn)镸-13噬菌體的衣殼蛋白僅由三個(gè)基因的多拷貝編碼,而λ噬菌體的衣殼由超過(guò)15種蛋白質(zhì)合成構(gòu)成λ向量的頭尾結(jié)構(gòu)。
2. M13的單鏈DNA稱(chēng)為+鏈。 在大腸桿菌細(xì)胞中,它通過(guò)利用大腸桿菌機(jī)制轉(zhuǎn)化為稱(chēng)為復(fù)制形式 (RF) 的雙鏈 DNA。
3. 該載體復(fù)制后釋放宿主細(xì)胞,無(wú)需細(xì)胞裂解
4. M13病毒的生命周期比λ載體簡(jiǎn)單得多,M13病毒通過(guò)菌毛進(jìn)入細(xì)菌宿主。 該 DNA 分子充當(dāng)合成新 DNA 鏈的模板。 DNA 的互補(bǔ)鏈形成,導(dǎo)致雙鏈 DNA 的形成。 但是DNA分子并沒(méi)有整合到細(xì)菌宿主染色體中。 這樣復(fù)制直到宿主細(xì)胞中存在 100 個(gè)拷貝。 如果是宿主細(xì)胞,則每個(gè)子細(xì)胞都會(huì)收到 M13 噬菌體 DNA 分子的拷貝。 這些噬菌體 DNA 分子繼續(xù)分裂以維持每個(gè)細(xì)胞的拷貝數(shù)。 由于DNA分子以單鏈形式釋放,這些噬菌體顆粒不斷組裝并從宿主細(xì)胞中釋放出來(lái),宿主細(xì)胞不會(huì)裂解,因此M13噬菌體分子可專(zhuān)門(mén)用于擴(kuò)增那些需要測(cè)序的DNA分子。
5. M13噬菌體的衣殼限制了可以與噬菌體分子連接的外源DNA的大小。 在衣殼中正確包裝 DNA 分子的合適大小為 38 至 51 kb 長(zhǎng)。 因此,大約 2.5 kb 的外源 DNA 可以被 M13 噬菌體克隆。 這種限制可以通過(guò)使用宿主的必需基因構(gòu)建載體并接受外源 DNA 到其理論最大值來(lái)克服。
M-13載體的使用
DNA測(cè)序
誘變研究
探針生成
探頭展示