Ro 5126766 （CH5126766） 是一種有效的雙重 MEK/RAF 抑制劑，抑制 BRAFV600E，CRAF, MEK，和 BRAF，IC50 分別為 8.2 nM, 56 nM, 160 nM 和 190 nM。

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　　生物活性

　　RO5126766 （RO5126766）是一種變構(gòu)抑制劑，可直接與MEK結(jié)合，通過形成穩(wěn)定的RAF-MEK復(fù)合物來阻止其被RAF磷酸化。ro5126766既能抑制RAF對MEK的磷酸化作用，也能抑制MEK對ERK的激活作用。在細(xì)胞游離MEK和RAF激酶檢測中，Ro 5126766能有效抑制MEK1對ERK2的激活，IC50為160 nM （SD=±0.043），抑制BRAF （IC50=190 nM, SD=±0.003）、BRAFV600E （IC50=8.2 nM, SD=±0.0015）、CRAF （IC50=56 nM, SD=±0.016）對MEK1蛋白的磷酸化。在一組包括KRAS/HRAS和BRAF突變細(xì)胞系以及KRAS/HRAS和BRAF野生型細(xì)胞的人類腫瘤細(xì)胞系中，Ro 5126766能有效抑制MEK和ERK的磷酸化。為了研究甲戊酸途徑是否影響MEK抑制劑的敏感性，我們對KRAS和BRAF突變的人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞進(jìn)行ro5126766 （CH5126766）處理，使用或不使用他丁類藥物，抑制甲戊酸途徑中的限速酶HMG-CoA還原酶。ro5126766與XU 62-320聯(lián)合處理比ro5126766單獨(dú)處理對細(xì)胞生長的抑制作用更明顯，且呈劑量依賴性。40 nM的Ro 5126766和0.3 μM的XU 62-320對細(xì)胞的集落形成也有明顯的抑制作用。

　　MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

　　體內(nèi)研究

　　在kras突變異種移植模型中，RO5126766?http://www.activeinhibitor.com/yzj/1005.html （RO5126766）比另一種變構(gòu)MEK抑制劑PD0325901更有效地抑制生長和引起腫瘤退化。一系列人類腫瘤小鼠異種移植模型的臨床前數(shù)據(jù)表明，Ro 5126766的ED50為0.03 ~ 0.23 mg/kg, ED90為0.15 ~ 1.56 mg/kg。這些有效劑量與靶槽濃度分別為17至133 ng/L和87至901 ng/mL相關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)中，在HCT116模型中給藥Ro 5126766 （CH5126766）和PD0325901，分別為其最大耐受劑量（MTD）（1.5 mg/kg和25 mg/kg）。在第一次給藥后4小時(shí)，這些劑量在腫瘤中抑制pERK和ERK信號(hào)輸出的程度相似。此外，在HCT116型號(hào)中，Ro 5126766和PD0325901的ED50分別為0.056和0.80 mg/kg。因此，本實(shí)驗(yàn)使用的劑量分別是50%有效劑量的26.8倍和31.3倍。每天口服任何一種藥物都會(huì)導(dǎo)致這些腫瘤顯著消退。然而，盡管在ro5126766治療的小鼠中，腫瘤生長的抑制在整個(gè)28天的治療期間保持不變，但接受PD0325901的腫瘤模型在治療10天后變得難治性。

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　　實(shí)驗(yàn)參考方法

　　細(xì)胞試驗(yàn)

　　用Cell Counting Kit-8法評(píng)估存活細(xì)胞的數(shù)量。人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞、人黑色素瘤SK-MEL-28細(xì)胞和人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞以每孔2000個(gè)細(xì)胞的密度接種在96孔板中，孵育24小時(shí)，然后用Ro 5126766（10、20、40和80 nM）處理72小時(shí)。用試劑盒試劑進(jìn)一步孵育4小時(shí)后，使用多板分析儀測量樣品在450 nM處的吸光度。

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　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法

　　老鼠

　　雌性BALB-nu/nu小鼠（CAnN。Cg-Foxn1nu/CrlCrlj nu/nu）被給予標(biāo)準(zhǔn)鼠糧和自由飲水。共5×106 （HCT116）或1×107 （Calu-6和COLO205）腫瘤細(xì)胞被注射到7- 9周齡小鼠的右側(cè)皮下。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到200 mm3（第0天）時(shí)，小鼠隨機(jī)分組，對照[5% DMSO和10% 2-羥丙基-β-環(huán)糊精（HPCD）蒸餾水溶液]，Ro 5126766 （1.5 mg/kg或2.0 mg/kg）或PD0325901 （25 mg/kg）每天口服1次。藥物以最大耐受劑量（MTD）給藥。計(jì)算腫瘤生長抑制（TGI）。計(jì)算每種化合物的50%有效劑量（ED50）值。

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