Sephadex G25(C-BETB002)應(yīng)用實(shí)例說明
Sephadex G25是一種葡聚糖層析培養(yǎng)基。在Sephadex G25中,提取物的交聯(lián)度決定了大分子滲透珠的程度。大分子被排除在外,而小分子根據(jù)其不同的尺寸在不同程度上進(jìn)入珠粒。因此,大分子首先離開柱子,然后是小分子。根據(jù)不同的粒度,Sephadex G25有四個(gè)等級(jí)(粗、中、細(xì)和超細(xì))。
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艾美捷Sephadex G25:
Cat #: C-BETB002
Size:
1. Resin: 10 mL, 50 mL, 100 mL, 250 mL, 500 mL, 1 L;
2. Prepacked Column: 5mL-Column
Storage: 20% ethanol or 0.01 M NaOH, 4-30°C
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Sephadex G25應(yīng)用實(shí)例:
色譜柱:XK16/30脫鹽柱,柱高25cm(Sephadex G25M)。
平衡緩沖液:20mM PB+150mM NaCl,pH 7.0,通過0.45μm過濾器過濾。
流速:2mL/min。
柱平衡:將色譜柱連接到純化儀器上,用2-3柱體積(CV)的平衡緩沖液洗滌脫鹽柱。
樣品裝載:添加1 mL樣品,以最大限度地延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,樣品應(yīng)在裝載前進(jìn)行澄清,例如以10000 g離心10分鐘或通過0.45μm過濾器過濾。洗脫:用平衡緩沖液洗滌脫鹽柱至少2 CV,流速不超過建議的最大流速。
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色譜圖如下:

圖1 5mL柱脫鹽色譜圖
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使用方法:
Sephadex G25通常用于不同分子量蛋白質(zhì)的脫鹽、緩沖液交換和分離。樣品體積根據(jù)具體應(yīng)用而變化,對(duì)于緩沖液交換或脫鹽,它可以高達(dá)柱體積的20%。
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Sephadex G25培養(yǎng)基需要第一次溶脹。放入過量的去離子水中并溶脹,例如,加入100-150 mL水使10g介質(zhì)溶脹,并使其溶脹至少3小時(shí)。也可以通過使用水浴加速溶脹(例如,在90°C下溶脹1小時(shí)),但應(yīng)避免劇烈攪拌以防止凝膠破裂。
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脫鹽介質(zhì)&脫鹽柱相關(guān)研究:
貨號(hào)?名稱
C-BETB002-100mL?Sephadex G25, 100mL
C-BETB002-10mL?Sephadex G25, 10mL
C-BETB002-1L?Sephadex G25, 1L
C-BETB002-250mL?Sephadex G25, 250mL
C-BETB002-500mL?Sephadex G25, 500mL
C-BETB002-50mL?Sephadex G25, 50mL
C-BETB002-5mL-Column?Sephadex G25, 5mL Prepacked Column
應(yīng)用:利用分子篩作用,進(jìn)行緩沖液交換、脫鹽,分離并去除小分子;?工業(yè)脫鹽。
備注:按凝膠介質(zhì)粒徑不同,Sephadex G25系列介質(zhì)可分為四類,分別為:Sephadex G25粗,?Sephadex G25中等,Sephadex G25細(xì)和?Sephadex G25超細(xì),上表的Sephadex G25屬于Sephadex G25(M)中等。??