一.HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關(guān)問(wèn)題？1）為什么要衍生？2）衍生化的分類(lèi)？3）進(jìn)行衍生，適用的化合物有哪些？4）進(jìn)行衍生化的要求有哪些？5）柱前衍生和柱后衍生的優(yōu)缺點(diǎn)？

? ? ? ?答：色譜技術(shù)中的化學(xué)衍生法系指在色譜過(guò)程中用特殊的化學(xué)試劑（一般稱(chēng)為衍生化試劑或標(biāo)記試劑）使樣品成分轉(zhuǎn)變相應(yīng)的衍生物之后進(jìn)行分離檢測(cè)或進(jìn)行檢測(cè)的方法。目的為：1．將紫外—可見(jiàn)強(qiáng)吸收功能基團(tuán)引入被檢測(cè)對(duì)象或?qū)⑵滢D(zhuǎn)變?yōu)闊晒庋苌?，以提高檢測(cè)靈敏度；2提高對(duì)分析樣品的分離和選擇性。

? ? ? ?從是否與HPLC系統(tǒng)聯(lián)機(jī)的角度，化學(xué)衍生法分為在線(xiàn)on line）與離線(xiàn)∣Off line）兩種。從發(fā)生衍生化的場(chǎng)合，分為柱前衍生法pre-columnderivatization）與柱后衍生法（post-columnderivatization）兩種。目前，在HPLC中，以離線(xiàn)的柱前衍生法（簡(jiǎn)稱(chēng)柱前衍生法）與在線(xiàn)的柱后衍生法（簡(jiǎn)稱(chēng)柱后衍生法）使用居多。

二.多個(gè)樣品不好不離的時(shí)候，請(qǐng)問(wèn)該怎么通過(guò)選擇合適的柱子來(lái)提高分離度？

? ? ? ?答：提高分離度可從三個(gè)主要影響因素來(lái)考慮，柱效、選擇性和保留因子?？赏ㄟ^(guò)減小填料粒徑和增加柱長(zhǎng)提高柱效；選擇性和固定相選擇以及pH條件有關(guān)，通過(guò)選擇合適的色譜柱和合適的pH，可以提高選擇性；有時(shí)候適當(dāng)延長(zhǎng)出峰時(shí)間增加保留因子，也可提高分離度。

三.苯基柱，氰基柱該什么時(shí)候考慮用？

? ? ? ?答：苯基柱用于含苯環(huán)的芳香族化合物的測(cè)定時(shí)，具有較高的選擇性。CN柱可作為一個(gè)保留能力最弱的反相柱使用，也可作為一個(gè)活性降低的正相柱使用（保留時(shí)間比硅膠柱和氨基柱低很多）。

四.同樣類(lèi)型柱子還有長(zhǎng)度，粒徑等差異，這些該怎么去選擇？

? ? ? ?答：長(zhǎng)度和粒徑都是用來(lái)改變柱效的，選擇原則是夠用就好。

五.我前幾天剛剛裝上一個(gè)新的C18柱，在進(jìn)樣之前我用100%的甲醇沖了半個(gè)多小時(shí)。剛才看到上面寫(xiě)的要活化什么的？不知道我只沖洗半小時(shí)就開(kāi)始用對(duì)柱子有沒(méi)有影響？對(duì)出峰什么的有沒(méi)有影響呢？

? ? ? ?答：不是所有的測(cè)定，都需要對(duì)新柱子用所測(cè)樣品老化。但先按方法程序進(jìn)樣幾針，觀察到峰面積保留時(shí)間不再有明顯變化，再開(kāi)始正式測(cè)定，這是一個(gè)好習(xí)慣。按你現(xiàn)在的做法，如果第一針和第二針的峰面積、保留時(shí)間沒(méi)有變化，就繼續(xù)做沒(méi)影響吧。

總結(jié)

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