在細(xì)胞凋亡中，PS 被轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外葉。細(xì)胞表面磷脂酰絲氨酸的出現(xiàn)是細(xì)胞凋亡初期/中期的通用指標(biāo)，可以在觀察到形態(tài)變化之前檢測到。該試劑盒使用特異性結(jié)合 PS 的綠色熒光 FITC-Annexin V 綴合物。FITC-Annexin V 綴合物已被證明可以選擇性結(jié)合 PS。該檢測試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可使用配備 488 nm 激光和 530/30 nm 發(fā)射濾光片（FITC 通道）的流式細(xì)胞儀監(jiān)測細(xì)胞凋亡。

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一、Cell Meter FITC-Annexin V細(xì)胞凋亡檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)方案：

簡要概述

1.用測試化合物（200μL/樣品）制備細(xì)胞
2.添加膜聯(lián)蛋白V-FITC測定溶液
3.在室溫下孵育30-60分鐘
4.使用FL1通道（Ex / Em = 490/525 nm）用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞

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操作步驟

1.用測試化合物處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間（用星形孢菌素處理的Jurkat細(xì)胞4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。注意：膜粘附細(xì)胞的膜聯(lián)蛋白V流式細(xì)胞術(shù)分析未經(jīng)常檢測，因?yàn)樵诩?xì)胞分離或收獲期間可能發(fā)生特定的膜損傷。然而，Casiola-Rosen等人先前報(bào)道了利用膜聯(lián)蛋白V對貼壁細(xì)胞類型進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)的方法。

2.離心細(xì)胞，得到2 - 5×105個(gè)細(xì)胞/管。

3.將細(xì)胞重懸于200μL測定緩沖液（組分B）中。

4.將2μL膜聯(lián)蛋白V-FITC（組分A）加入細(xì)胞中。

5.可選：加入2μL100X碘化丙啶（成分C）用于壞死細(xì)胞。

6.在室溫下孵育30至60分鐘，避光。

7.可選：在使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞之前，添加200至300μL的測定緩沖液（組分B）以增加體積。

8.使用具有FL1通道的流式細(xì)胞儀（Ex / Em = 490 / 525nm）監(jiān)測膜聯(lián)蛋白V-FITC的熒光強(qiáng)度。當(dāng)?shù)饣ぜ尤爰?xì)胞時(shí)，使用FL2通道測量細(xì)胞活力。

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二、Cell Meter FITC-Annexin V細(xì)胞凋亡檢測試劑盒光譜性質(zhì)

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?光譜特性

?校正因子: ???????????0.35

消光系數(shù): ???????????73000

Ex(nm): ?????????????491

Em(nm): ?????????????516

量子產(chǎn)率: ???????????0.92