摘要

背景:

外周血白細(xì)胞端粒短與老年及年齡相關(guān)性疾病有關(guān)。我們測(cè)試了短端粒與增加癌癥死亡率和全因死亡率相關(guān)的假設(shè)。

方法:

個(gè)體(n = 64637)從1991年開(kāi)始從兩個(gè)丹麥前瞻性隊(duì)列研究中招募: 哥本哈根城市心臟研究和哥本哈根一般人口研究。他們的端粒長(zhǎng)度均以即時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測(cè)量，基因型 rs1317082(TERC)、 rs7726159(TERT)及 rs2487999(OBFC1)則測(cè)定。計(jì)算了這三個(gè)基因型的端?？s短等位基因的總和。我們使用等位基因和作為工具進(jìn)行 Cox 回歸分析和工具變量分析。所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)都是雙側(cè)的。

結(jié)果:

在隨訪期間死亡的7607人中(0-22年，中位數(shù) = 7年) ，2420人患有癌癥，2633人死于心血管疾病。

端粒長(zhǎng)度十分位數(shù)的減少與全因死亡率的增加有關(guān)(P 趨勢(shì) = 2 * 10-15)。多變量調(diào)整后的全因死亡風(fēng)險(xiǎn)比為1.40(95% 的置信區(qū)間[ CI ] = 1.25至1.57)。癌癥死亡率和心血管死亡率的結(jié)果相似。

對(duì)于等位基因總和，每個(gè)等位基因的端粒長(zhǎng)度減少了69個(gè)堿基對(duì)(95% CI = 61至76) ，癌癥死亡率的每個(gè)等位基因風(fēng)險(xiǎn)比為0.95(95% CI = 0.91至0.99)。等位基因總和與心血管疾病、其他疾病或全因死亡率無(wú)關(guān)。

結(jié)論:

在關(guān)聯(lián)分析中，外周血白細(xì)胞端粒短與高死亡率相關(guān)。相比之下，基因決定的短端粒與低癌癥死亡率有關(guān)，但與全因死亡率無(wú)關(guān)。

引言

端粒由位于染色體末端的 TTAGGG 核苷酸的蛋白質(zhì)和串聯(lián)重復(fù)序列組成。在正常有絲分裂的 DNA 復(fù)制過(guò)程中，端粒 DNA 由于末端復(fù)制問(wèn)題而縮短(1)。當(dāng)端粒達(dá)到極短的長(zhǎng)度時(shí)，細(xì)胞就會(huì)衰老，無(wú)法進(jìn)一步分裂。這個(gè)過(guò)程限制了不受控制的細(xì)胞分裂，因此，被認(rèn)為可以預(yù)防癌癥(2)。

端粒短與年齡大、男性和不良的生活方式因素如吸煙和肥胖有關(guān)(3)。白細(xì)胞端粒長(zhǎng)度已被研究作為年齡相關(guān)疾病如心血管疾病(4,5) ，慢性阻塞性肺病(6-8)和糖尿病(9,10)的潛在生物標(biāo)志物。它也是一些(4,11,12)但不是所有研究(13)中全因死亡率的標(biāo)志。

端粒酶在一些癌細(xì)胞中被激活，使得它們能夠維持有助于癌細(xì)胞永生化的端粒長(zhǎng)度(2,14)。然而，關(guān)于短端粒長(zhǎng)度和癌癥風(fēng)險(xiǎn)以及癌癥診斷后死亡率增加的潛在相關(guān)性，存在相互矛盾的證據(jù)。一些研究發(fā)現(xiàn)端粒短與癌癥風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)(15,16) ，而另一些則沒(méi)有發(fā)現(xiàn)(17)。同樣，一些發(fā)現(xiàn)短端?；颊咴诎┌Y診斷后存活率降低(17-20) ，而另一些則沒(méi)有(21)。

端粒長(zhǎng)度和死亡率之間關(guān)系的觀察性分析被端粒長(zhǎng)度和死亡率與年齡，性別，不良生活方式和社會(huì)經(jīng)濟(jì)特征的強(qiáng)相關(guān)性所混淆(3,4)。然而，最近的研究已經(jīng)確定了與端粒長(zhǎng)度相關(guān)的基因中的單核苷酸多態(tài)性(SNP)(22-25)。這使得對(duì)端粒長(zhǎng)度與死亡率之間的關(guān)系進(jìn)行遺傳分析成為可能。

在一項(xiàng)對(duì)64637名個(gè)體的研究中，我們測(cè)試了這樣一個(gè)假設(shè)，即在外周血白細(xì)胞中測(cè)量到的短端粒與觀察到的癌癥死亡率和全因死亡率以及遺傳學(xué)上的增加有關(guān)。

方法

研究設(shè)計(jì)

我們研究了哥本哈根一般人口研究的56216名參與者，他們?cè)?003年至2009年期間入選，哥本哈根城市心臟研究的8421名參與者在1991年至1994年期間入選。在這些丹麥普通人口研究(4,6)中，哥本哈根居民被邀請(qǐng)完成一份問(wèn)卷并接受體格檢查。抽取血樣進(jìn)行生化測(cè)定和 DNA 分離。這兩項(xiàng)研究之間沒(méi)有個(gè)體重疊。只有具有可用端粒長(zhǎng)度測(cè)量和所研究的 SNP 確定的基因型的白色丹麥個(gè)體被包括在內(nèi)(補(bǔ)充圖1，可在線獲得)。所有參與者都給出了書(shū)面知情同意書(shū)，丹麥倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了這些研究(H-KF01-144/01和 KF100.2039/91)。

端粒長(zhǎng)度測(cè)量

使用 Qiagen 血液試劑盒(26)測(cè)量從外周血白細(xì)胞分離的 DNA 中的端粒長(zhǎng)度。我們使用了一種改良的單色多重即時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法，這是唯一可用于大規(guī)模測(cè)量的方法。我們使用白蛋白的參考單拷貝基因來(lái)調(diào)整樣品中不同數(shù)量的 DNA。參與者的 DNA 一式四份進(jìn)行分析。通過(guò)在 K562細(xì)胞系 DNA 上測(cè)量，校準(zhǔn)后得出絕對(duì)端粒長(zhǎng)度，其端粒長(zhǎng)度設(shè)定為5290個(gè)堿基對(duì)，由WB法(27)確定，并包括在每個(gè)平板中。有關(guān)完整的描述，請(qǐng)參閱補(bǔ)充方法(可在線獲得)。

基因分型

對(duì)研究人群進(jìn)行 rs1317082、 rs7726159和 rs2487999的基因分型。在一項(xiàng)包括哥本哈根城市心臟研究樣本的研究中，我們選擇了這三個(gè) SNP，因?yàn)樗鼈兪桥c端粒長(zhǎng)度相關(guān)的 SNP 的效應(yīng)大小最大的三個(gè)最顯著的命中(24)。這些 SNP 位于與端粒生物學(xué)相關(guān)的基因中: rs1317082位于 TERC 基因附近的3q26.2處，rs7726159位于 TERT 基因中的5p15.3處，rs2487999位于 OBFC1基因中的10q24.3處。TERT 和 TERC 編碼端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶和端粒酶 RNA 模板，這是端粒伸長(zhǎng)所必需的。OBFC1編碼部分調(diào)節(jié)端粒酶活性的 CST 復(fù)合體(29)。我們使用 Taqman 方法(Applied Biosystems，Life Technologies，卡爾斯巴德)對(duì)來(lái)自哥本哈根一般人口研究的個(gè)體進(jìn)行基因分型。要獲得完整的描述，包括關(guān)于引物和探針的詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱補(bǔ)充方法和補(bǔ)充表1(可在線獲得)。來(lái)自哥本哈根市心臟研究的個(gè)體的基因分型是使用 Illumina 定制的基因分型芯片(30)(Illumina)進(jìn)行的。所有基因型均處于 Hardy-Weinberg 平衡狀態(tài)(chi2檢驗(yàn): rs1317082的 P = .98，rs7726159的 P = .90，rs2487999的 P = .58)。

等位基因和被定義為三種基因型端粒長(zhǎng)度縮短等位基因的總和，因此理論上范圍從0(3x0)到6(3x2)。我們將具有0和1個(gè)等位基因總和的個(gè)體合并為一組，因?yàn)橹挥?8個(gè)個(gè)體具有0個(gè)端粒長(zhǎng)度縮短等位基因。

死亡終點(diǎn)

我們使用丹麥中央人事登記處獲取2013年4月23日之前死亡的所有參與者的死亡日期。全因死亡定義為任何死亡，不論死因。沒(méi)有參與者失去了后續(xù)行動(dòng)，那些移民(n = 286)在移民之日被審查。

我們進(jìn)一步使用丹麥國(guó)家死因登記冊(cè)根據(jù)死亡原因?qū)λ兴劳鲞M(jìn)行分類，該登記冊(cè)基于醫(yī)院主治醫(yī)生報(bào)告的死亡證明信息或在丹麥人死亡時(shí)的全科醫(yī)生報(bào)告的死亡證明信息。我們使用 ICD-8和 ICD-10診斷將所有死亡分類為癌癥死亡率、心血管死亡率和其他原因引起的死亡。在丹麥，可以在死亡證明上列出最多三種死因，一些與會(huì)者的死因不止一種。因此，癌癥、心血管疾病和其他原因造成的死亡總數(shù)超過(guò)了死亡總數(shù)。2011年12月31日之后死亡原因不詳，此日期之后的1184例死亡被歸類為未指明的死因。

協(xié)變量

所有的基線特征被記錄下來(lái)，或者從檢查當(dāng)天收集的數(shù)據(jù)中得出，這些數(shù)據(jù)基于自填問(wèn)卷、體格檢查和血液樣本。我們根據(jù)先前的研究選擇了協(xié)變量，表明這些變量最有可能導(dǎo)致死亡率(31)。體重指數(shù)由測(cè)量體重(kg)除以身高平方(m2)計(jì)算。在體格檢查時(shí)測(cè)量收縮壓。吸煙狀況、每周酒精攝入量(12g 酒精 ~ 1單位)和體力活動(dòng)水平均自我報(bào)告。包年，即一年中每天消耗20支香煙或相當(dāng)于20支的香煙，是根據(jù)有關(guān)當(dāng)前和過(guò)去吸煙習(xí)慣問(wèn)題的信息計(jì)算出來(lái)的。標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)院比色法測(cè)定血漿總膽固醇(mmol/L)。對(duì)于多變量調(diào)整，根據(jù)年齡和性別(< 1%)估算缺失的連續(xù)值，并將缺失的分類值分配到缺失類別(< 0.5%)。

統(tǒng)計(jì)分析

我們使用的是 Stata 版本12.0(StataCorp，College Station，TX)。所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)都是雙側(cè)的。除非進(jìn)行多重比較，否則顯著性水平的 P 值小于0.05，在這種情況下，我們使用邦弗朗尼校正。對(duì)于趨勢(shì)測(cè)試，根據(jù)編碼為1至10的端粒長(zhǎng)度減少(第一個(gè)十分位數(shù)由具有最長(zhǎng)端粒的個(gè)體組成)或根據(jù)編碼為1至6的等位基因和(第一組代表具有最長(zhǎng)端粒的遺傳易感性的個(gè)體) ，將個(gè)體分為研究特定的十分位數(shù)。

關(guān)聯(lián)分析

我們使用 Cox 回歸分析。對(duì)于這些分析，隨訪開(kāi)始于檢查和血液采樣，結(jié)束于死亡、移民或2013年4月23日，以先到者為準(zhǔn)。多變量模型調(diào)整了年齡，性別，體重指數(shù)，收縮壓，吸煙狀況，煙草消費(fèi)，酒精消費(fèi)，體力活動(dòng)和膽固醇水平。我們根據(jù)端粒長(zhǎng)度十分位數(shù)評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)，并以端粒長(zhǎng)度最長(zhǎng)的十分位數(shù)組作為參照組。我們使用 Schoenfeld 殘差評(píng)估了比例風(fēng)險(xiǎn)假設(shè); 沒(méi)有觀察到重大違規(guī)。所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)都是雙側(cè)的。

基因分析

對(duì)于 Cox 回歸模型，我們還檢查了在連續(xù)尺度上每200堿基對(duì)端粒長(zhǎng)度減少的風(fēng)險(xiǎn)。這個(gè)任意的選擇代表了大約10年的增長(zhǎng)年齡(4,6) ，因此，預(yù)計(jì)將推斷出相當(dāng)大的增加死亡率。我們?cè)谖唇?jīng)調(diào)整的 Cox 回歸分析中，根據(jù)等位基因總和以及三個(gè) SNP 的每個(gè)等位基因檢查了死亡率?；驔Q定的200堿基對(duì)端粒長(zhǎng)度減少的死亡率的比值比是通過(guò)使用兩階段工具變量的控制函數(shù)估計(jì)器進(jìn)行的回歸分析分析得出的(32)。第一階段是將等位基因和作為端粒長(zhǎng)度的連續(xù)工具的線性回歸。第二階段是端粒長(zhǎng)度對(duì)死亡率的預(yù)測(cè)值(包括第二階段 Logit模型中第一階段線性回歸的估計(jì)殘余 Logit模型)。第一階段回歸分析產(chǎn)生的部分 R 平方為0.005，F(xiàn) 值為342，F(xiàn) 值大于10表示遺傳資料具有足夠的統(tǒng)計(jì)強(qiáng)度，可用作工具(33)。圖1進(jìn)一步描述了這種孟德?tīng)栯S機(jī)化設(shè)計(jì)。

敏感性分析

我們通過(guò) Fine 和 Gray (34)的方法計(jì)算亞風(fēng)險(xiǎn)比來(lái)計(jì)算死亡風(fēng)險(xiǎn)，使用非癌癥死亡率作為癌癥死亡率的競(jìng)爭(zhēng)事件，非心血管死亡率作為心血管死亡率的競(jìng)爭(zhēng)事件，癌癥和心血管死亡率作為其他原因?qū)е滤劳龅母?jìng)爭(zhēng)事件; 參與者僅隨訪至2011年12月31日。對(duì)于分層分析，我們測(cè)試了相互作用的似然比檢驗(yàn)，比較了主效應(yīng)模型與模型也包括一個(gè)雙因素相互作用項(xiàng)。

結(jié)果

在這個(gè)來(lái)自一般人群的64637個(gè)個(gè)體的樣本中，端粒長(zhǎng)度每年增加17.4個(gè)堿基對(duì)(95% 的置信區(qū)間[ CI ] = 17.0至17.8)(P < 1 * 10-300)(補(bǔ)充圖2，可在線獲得)。減少端粒長(zhǎng)度十分位數(shù)與所有潛在混雜因素有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著相關(guān)(表1)。值得注意的是，等位基因總和與任何混雜因素?zé)o關(guān)(表1; 補(bǔ)充表2，可在線獲得)。

共有7607人(12%)在隨訪期間死亡; 2420人患有癌癥，2633人死于心血管疾病。中位隨訪時(shí)間為7年(范圍 = 0至22年)。在年齡調(diào)整分析中，端粒長(zhǎng)度減少十分位數(shù)與全因死亡率增加有關(guān)(P 趨勢(shì) = 3 * 10-30) ，在多變量調(diào)整后減弱(P 趨勢(shì) = 2 * 10-15)(圖2)。對(duì)于第十個(gè)(端粒長(zhǎng)度最短)與第一個(gè)十分位數(shù)的個(gè)體，多變量調(diào)整后的死亡風(fēng)險(xiǎn)比為1.40(95% CI = 1.25-1.57)。癌癥死亡率、心血管死亡率、其他原因引起的死亡和未明確的死亡原因的結(jié)果相似(補(bǔ)充表3，可在線獲得)。

當(dāng)分析總和(PTrends = 1 * 10-104)(圖3)和三個(gè)單個(gè) SNP 中的每一個(gè)(補(bǔ)充表4，在線可獲得)時(shí)，端粒隨著等位基因數(shù)量的增加而縮短; 平均每個(gè)等位基因減少69個(gè)堿基對(duì)(95% CI = 61至76)。

在 Cox 回歸模型中，對(duì)于組合等位基因總和，癌癥死亡率的每個(gè)等位基因風(fēng)險(xiǎn)比為0.95(95% CI = 0.91至0.99) ，rs2487999(OBFC1)為0.90(95% CI = 0.90至1.02) ，rs7726159(TERT)為0.96(95% CI = 0.90至1.03) ，rs1317082(TERC)為0.96(95% CI = 0.90至1.03)(圖4)。無(wú)論是等位基因總和還是三個(gè)單獨(dú)的 SNPs 都與心血管死亡率、其他原因引起的死亡、未明確的死亡原因或全因死亡率無(wú)關(guān)。三個(gè) SNP 的不同組合產(chǎn)生了相似的結(jié)果(補(bǔ)充表5，可在線獲得)。

在多變量調(diào)整的觀察性分析中，200堿基對(duì)較短端粒長(zhǎng)度的癌癥死亡風(fēng)險(xiǎn)比為1.02(95% CI = 1.01至1.03)(圖5)。心血管死亡率、其他原因引起的死亡、未明確的死亡原因和全因死亡率的觀察性分析結(jié)果相似。相比之下，基因決定的端粒長(zhǎng)度的200堿基對(duì)減少與癌癥死亡率降低有關(guān)(比值比 = 0.86,95% CI = 0.76-0.96)(圖5) ，但與心血管死亡率，其他原因?qū)е碌乃劳?，未指定的死亡原因或全因死亡率?br>

當(dāng)我們考慮到來(lái)自其他原因的死亡風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，特定原因死亡率的結(jié)果仍然相似(補(bǔ)充圖3，可在線獲得)。此外，當(dāng)我們只考慮每個(gè)人的一個(gè)死亡原因時(shí)，結(jié)果是相似的(結(jié)果未顯示)。

在根據(jù)人口，年齡，性別，體重指數(shù)，收縮壓，吸煙狀況，飲酒，體力活動(dòng)水平和膽固醇水平對(duì)200堿基對(duì)端粒長(zhǎng)度減少的癌癥死亡率進(jìn)行分層多變量調(diào)整的觀察分析中，我們沒(méi)有發(fā)現(xiàn)相互作用的證據(jù)(補(bǔ)充圖4，可在線獲得)。在類似的分層遺傳學(xué)分析中，癌癥死亡率的所有比值比大大低于1，我們沒(méi)有發(fā)現(xiàn)相互作用的證據(jù)。

討論

在這項(xiàng)對(duì)64637名普通人群的研究中，我們已經(jīng)證實(shí)(11,20,35)和重復(fù)(4,17)以前的發(fā)現(xiàn)短端粒與高死亡率(包括癌癥死亡率)之間的觀察性關(guān)聯(lián)。此外，與此相反，我們發(fā)現(xiàn)基因短端粒與低癌癥死亡率有關(guān)，但與低心血管死亡率、其他原因死亡或全因死亡率無(wú)關(guān)。這意味著基因長(zhǎng)端粒與癌癥死亡率增加有關(guān)。這是一個(gè)新奇的發(fā)現(xiàn)。補(bǔ)充圖5(可在線獲得)總結(jié)了我們對(duì)癌癥和全因死亡率的結(jié)果。

盡管出乎意料，但是當(dāng)我們考慮端?？s短和維持的生物學(xué)時(shí)，我們看似矛盾的發(fā)現(xiàn)可能就不那么令人困惑了。端粒短以及癌癥死亡率已被證明與年齡增長(zhǎng)、男性、吸煙、肥胖和幾種與年齡相關(guān)的疾病有關(guān)(3,16)。因此，觀察結(jié)果可以用獨(dú)立導(dǎo)致端?？s短和癌癥死亡率增加的共同因素來(lái)解釋，而沒(méi)有短的端粒長(zhǎng)度本身介導(dǎo)增加的死亡率。因此，觀測(cè)分析很可能是混淆的。相反，長(zhǎng)端粒的遺傳傾向可能通過(guò)增加某些細(xì)胞類型的端粒長(zhǎng)度維持來(lái)影響癌癥死亡率，否則這些細(xì)胞類型將經(jīng)歷衰老和凋亡。本研究中檢測(cè)的所有三種基因型都與端粒生物學(xué)有關(guān): 其中兩種可能通過(guò)端粒酶的 TERT 和 TERC 組分，第三種可能通過(guò)調(diào)節(jié)端粒酶活性的 CST 復(fù)合物。端粒的維持對(duì)于腫瘤的長(zhǎng)期發(fā)展至關(guān)重要，因?yàn)槎肆Ｃ富钚栽谡ｓw細(xì)胞中通常較低或不存在，已經(jīng)在大多數(shù)類型的人類癌癥中發(fā)現(xiàn)(2,14)。因此，我們的研究可能表明，在端?？s短等位基因很少的個(gè)體中產(chǎn)生的癌細(xì)胞可能繼承了這個(gè)個(gè)體良好的端粒維持能力，因此，這個(gè)具有基因長(zhǎng)端粒的個(gè)體將具有增加的癌癥死亡率，僅僅因?yàn)榘┘?xì)胞不斷分裂和癌癥生長(zhǎng)更多，最終導(dǎo)致患者死亡。在我們的觀察和遺傳分析中，這種關(guān)聯(lián)的相反方向可以與發(fā)現(xiàn)的用于預(yù)防早期死亡的抗氧化劑補(bǔ)充劑進(jìn)行比較?；趧?dòng)物模型和觀察性研究，抗氧化劑補(bǔ)充劑長(zhǎng)期以來(lái)被認(rèn)為具有延長(zhǎng)生命的作用，但包括大型 Cochrane 綜述在內(nèi)的隨機(jī)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)沒(méi)有證據(jù)支持這種作用(36)。事實(shí)上，β-胡蘿卜素和維生素 E 補(bǔ)充劑似乎會(huì)增加死亡率。

在圖1的圖例中列出的孟德?tīng)栯S機(jī)化研究的假設(shè)似乎在這項(xiàng)研究中得到了滿足。假設(shè)1: 用作遺傳工具的等位基因和是由三個(gè) SNP 構(gòu)建的，即使在使用另一種端粒長(zhǎng)度測(cè)量技術(shù)的其他研究中，這些 SNP 也與端粒長(zhǎng)度高度相關(guān)(23,25)。它們位于三個(gè)不同的染色體上，因此不太可能有遺傳聯(lián)系。這意味著，當(dāng)把等位基因的數(shù)量加在一起時(shí)，三種基因型中的每一種的效應(yīng)可能只計(jì)算一次。此外，這三個(gè)基因都編碼涉及端粒酶活性和端粒維持的復(fù)合物的已知和重要組成部分。雖然該儀器只能解釋端粒長(zhǎng)度變化的0.5% ，但它的 F 值非常高，為342。假設(shè)2: 我們沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何跡象表明等位基因總和和混雜因素之間存在關(guān)聯(lián)。假設(shè)3: 等位基因和應(yīng)該只通過(guò)端粒長(zhǎng)度影響死亡率。雖然 TERT 中的一些 SNP 最近被報(bào)道與不同癌癥的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)(30,37) ，但這里使用的 rs7726159 SNP 在這些 SNP 中并不是獨(dú)立的。

我們研究的優(yōu)勢(shì)包括64637名個(gè)體的大樣本量，其中包括2013年4月23日之前死亡的所有個(gè)體的死亡日期的準(zhǔn)確信息，這使得全因死亡率的隨訪長(zhǎng)達(dá)22年。我們的研究還有一些固有的局限性，這些局限性與應(yīng)用方法有關(guān)，包括使用死亡原因登記冊(cè)，該登記冊(cè)不僅僅依賴于尸檢結(jié)果，而是基于主治醫(yī)師的判斷。然而，一個(gè)不準(zhǔn)確確定的死亡原因會(huì)傾向于將結(jié)果拉向無(wú)效假設(shè)，因此不太可能解釋我們關(guān)于癌癥死亡率的發(fā)現(xiàn)。全因死亡登記是非常可靠的，因?yàn)榈湻梢?guī)定必須進(jìn)行登記，因此被認(rèn)為是100% 完成的。

目前還沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)的校準(zhǔn)器，因此，端粒長(zhǎng)度測(cè)量沒(méi)有明確的可追溯性(3,38)。我們使用定量 PCR 來(lái)測(cè)量端粒長(zhǎng)度，因?yàn)檫@是像我們這樣的大規(guī)模研究的唯一實(shí)用方法。與第一種測(cè)量端粒長(zhǎng)度的方法WB法比較，定量 PCR 測(cè)量的是與二倍體基因組相關(guān)的 TTAGGG 重復(fù)序列的平均累積量，而不是端粒本身的長(zhǎng)度。由于WB法通常測(cè)量含有 TTAGGG 重復(fù)序列(包括亞端粒片段)的片段的平均值和分布，這兩種方法不能直接比較，兩種方法之間的 r2相關(guān)性根據(jù)出版物的不同而變化，從36% 到大于80% (38)。然而，我們的單中心端粒長(zhǎng)度測(cè)量具有較低的不精確性，并且顯示出與年齡預(yù)期的非常強(qiáng)的相關(guān)性，P 值小于1 * 10-300。關(guān)于我們的端粒長(zhǎng)度測(cè)量的另一個(gè)限制是，我們測(cè)量的是平均外周白細(xì)胞端粒長(zhǎng)度，這可能不一定反映端粒長(zhǎng)度的所有細(xì)胞的身體。然而，早期的研究表明，白細(xì)胞端粒長(zhǎng)度與其他細(xì)胞類型的端粒長(zhǎng)度相關(guān)(39)。

不可否認(rèn)，選擇200個(gè)堿基對(duì)的端?？s短是任意的，也可能是20個(gè)堿基對(duì)或1000個(gè)堿基對(duì)。然而，由于端粒長(zhǎng)度是一個(gè)連續(xù)的測(cè)量，任何其他縮短的選擇只會(huì)改變估計(jì)的尺度，而不是 P 值。

總之，在關(guān)聯(lián)分析中，外周血白細(xì)胞的短端粒與高死亡率有關(guān)。相比之下，基因決定的短端粒與低癌癥死亡率有關(guān)，但與全因死亡率無(wú)關(guān)。這意味著基因決定的長(zhǎng)端粒與高癌癥死亡率有關(guān)。我們推測(cè)，長(zhǎng)端?？赡艽砹税┘?xì)胞的生存優(yōu)勢(shì)，允許多個(gè)細(xì)胞分裂導(dǎo)致高癌癥死亡率。

參考

Rode L, Nordestgaard BG, Bojesen SE. Peripheral blood leukocyte telomere length and mortality among 64,637 individuals from the general population. J Natl Cancer Inst. 2015 Apr 10;107(6):djv074. doi: 10.1093/jnci/djv074IF: 11.816?Q1?. PMID: 25862531