如何測(cè)定蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)
蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),又稱初級(jí)結(jié)構(gòu),是指蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序以及二硫鍵的位置和數(shù)量。蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)是形成高級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ),一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定在一定程度上也有助于高級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)。
常用的蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定方法包括蛋白質(zhì)測(cè)序法、DNA測(cè)序法以及質(zhì)譜測(cè)序法等。蛋白質(zhì)測(cè)序法以C端/N端測(cè)序?yàn)橹?,主要?duì)蛋白質(zhì)兩端的氨基酸序列進(jìn)行測(cè)定。DNA測(cè)序法根據(jù)已經(jīng)測(cè)定的部分氨基酸序列設(shè)計(jì)引物,擴(kuò)增出其mRNA,從而推斷蛋白質(zhì)的全部氨基酸序列。質(zhì)譜法將已知分子質(zhì)量的、純化后的蛋白酶解為小片段多肽并進(jìn)行序列分析,根據(jù)小肽段之間的重疊區(qū)確定小肽段的排列順序,依此推演整條多肽鏈的氨基酸序列。
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