8．（轉(zhuǎn)自博客）.

什么叫內(nèi)標(biāo)法?怎樣選擇內(nèi)標(biāo)物?

內(nèi)標(biāo)法是一種間接或相對(duì)的校準(zhǔn)方法。在分析測(cè)定樣品中某組分含量時(shí)，加入一種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)以校誰(shuí)和消除出于操作條件的波動(dòng)而對(duì)分析結(jié)果產(chǎn)生的影響，以提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度。

內(nèi)標(biāo)法在氣相色譜定量分析中是一種重要的技術(shù)。使用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，在樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，它可被色譜拄所分離，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測(cè)定內(nèi)標(biāo)物和待測(cè)組分的峰面積與相對(duì)響應(yīng)值，即可求出待測(cè)組分在樣品中的百分含量。采用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)，內(nèi)標(biāo)物的選擇是一項(xiàng)十分重要的工作。理想地說(shuō)，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)是一個(gè)能得到純樣的己知化合物，這樣它能以準(zhǔn)確、已知的量加到樣品中去，它應(yīng)當(dāng)和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如化學(xué)結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征，最好是被分析物質(zhì)的一個(gè)同系物。當(dāng)然，在色譜分析條什下，內(nèi)標(biāo)物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是，在少數(shù)情況下，分析人員可能比較關(guān)心化臺(tái)物在一個(gè)復(fù)雜過(guò)程中所得到的回收率，此時(shí)，他可以使用一種在這種過(guò)程中很容易被完全回收的化臺(tái)物作內(nèi)標(biāo)，來(lái)測(cè)定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說(shuō)的選擇原則。

在使用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)，有哪些因素會(huì)影響內(nèi)標(biāo)和被測(cè)組分的峰高或峰面積的比值?

影響內(nèi)標(biāo)和被測(cè)組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學(xué)方面的、色譜方面的和儀器方面的三類。

由化學(xué)方面的原因產(chǎn)生的面積比的變化常常在分析重復(fù)樣品時(shí)出現(xiàn)。

化學(xué)方面的因素包括：
1、內(nèi)標(biāo)物在樣品里混合不好；
2、內(nèi)標(biāo)物和樣品組分之間發(fā)生反應(yīng)，
3、內(nèi)標(biāo)物純度可變等。

對(duì)于一個(gè)比較成熟的方法來(lái)說(shuō)，色譜方面的問(wèn)題發(fā)生的可能性更大一些，色譜上常見的一些問(wèn)題(如滲漏)對(duì)絕對(duì)面積的影響比較大，對(duì)面積比的影響則要小一些，但如果絕對(duì)面積的變化已大到足以使面積比發(fā)生顯著變化的程度，那么一定有某個(gè)重要的色譜問(wèn)題存在，比如進(jìn)樣量改變太大，樣品組分濃度和內(nèi)標(biāo)濃度之間有很大的差別，檢測(cè)器非線性等。進(jìn)樣量應(yīng)足夠小并保持不變，這樣才不致于造成檢測(cè)器和積分裝置飽和。如果認(rèn)為方法比較可靠，而色譜固看來(lái)也是正常的話，應(yīng)著重檢查積分裝置和設(shè)置、斜率和峰寬定位。對(duì)積分裝置發(fā)生懷疑的最有力的證據(jù)是：面積比可變，而峰高比保持相對(duì)恒定。

在制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)注意什么?

在用內(nèi)標(biāo)法做色譜定量分析時(shí)，先配制一定重量比的被測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)樣品的混合物做色譜分析，測(cè)量峰面積，做重量比和面積比的關(guān)系曲線，此曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。在實(shí)際樣品分析時(shí)所采用的色譜條件應(yīng)盡可能與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)所用的條件一致，因此，在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，不僅要注明色譜條件(如固定相、柱溫、載氣流速等)，還應(yīng)注明進(jìn)樣體積和內(nèi)標(biāo)物濃度。在制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，各點(diǎn)并不完全落在直線上，此時(shí)應(yīng)求出面積比和重量比的比值與其平均位的標(biāo)準(zhǔn)偏差，在使用過(guò)程中應(yīng)定期進(jìn)行單點(diǎn)校正，若所得值與平均值的偏差小于2，曲線仍可使用，若大于2，則應(yīng)重作曲線，如果曲線在鉸短時(shí)期內(nèi)即產(chǎn)生變動(dòng)，則不宜使用內(nèi)標(biāo)法定量。?

外標(biāo)法

用待測(cè)組分的純品作對(duì)照物質(zhì)，以對(duì)照物質(zhì)和樣品中待測(cè)組分的響應(yīng)信號(hào)相比較進(jìn)行定量的方法稱為外標(biāo)法。此法可分為工作曲線法及外標(biāo)一點(diǎn)法等。工作曲線法是用對(duì)照物質(zhì)配制一系列濃度的對(duì)照品溶液確定工作曲線，求出斜率、截距。在完全相同的條件下，準(zhǔn)確進(jìn)樣與對(duì)照品溶液相同體積的樣品溶液，根據(jù)待測(cè)組分的信號(hào)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度，或用回歸方程計(jì)算，工作曲線法也可以用外標(biāo)二點(diǎn)法代替。通常截距應(yīng)為零，若不等于零說(shuō)明存在系統(tǒng)誤差。工作曲線的截距為零時(shí)，可用外標(biāo)一點(diǎn)法(直接比較法)定量。

外標(biāo)一點(diǎn)法是用一種濃度的對(duì)照品溶液對(duì)比測(cè)定樣品溶液中i組分的含量。將對(duì)照品溶液與樣品溶液在相同條件下多次進(jìn)樣，測(cè)得峰面積的平均值，用下式計(jì)算樣品中i組分的量：

W＝A(W)／(A)

式中W與A分別代表在樣品溶液進(jìn)樣體積中所含i組分的重量及相應(yīng)的峰面積。(W)及(A)分別代表在對(duì)照品溶液進(jìn)樣體積中含純品i組分的重量及相應(yīng)峰面積。外標(biāo)法方法簡(jiǎn)便，不需用校正因子，不論樣品中其他組分是否出峰，均可對(duì)待測(cè)組分定量。但此法的準(zhǔn)確性受進(jìn)樣重復(fù)性和實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定性的影響。此外，為了降低外標(biāo)一點(diǎn)法的實(shí)驗(yàn)誤差，應(yīng)盡量使配制的對(duì)照品溶液的濃度與樣品中組分的濃度相近。

外標(biāo)法 external standard method 色譜分析中的一種定量方法，它不是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測(cè)樣品中，而是在與被測(cè)樣品相同的色譜條件下單獨(dú)測(cè)定，把得到的色譜峰面積與被測(cè)組分的色譜峰面積進(jìn)行比較求得被測(cè)組分的含量。外標(biāo)物與被測(cè)組分同為一種物質(zhì)但要求它有一定的純度，分析時(shí)外標(biāo)物的濃度應(yīng)與被測(cè)物濃度相接近，以利于定量分析的準(zhǔn)確性。

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定量分析中怎樣選擇內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法

選一與欲測(cè)組分相近但能完全分離的組分做內(nèi)標(biāo)物（當(dāng)然是樣品中沒有的組分），然后配制欲測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣得相對(duì)校正因子。再將內(nèi)標(biāo)物加入欲測(cè)組分的樣品中，進(jìn)樣后測(cè)得欲測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物的定量參數(shù)。用內(nèi)標(biāo)法公式計(jì)算即可。

內(nèi)標(biāo)法是將一定量的純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，加入到準(zhǔn)確稱量的試樣中，根據(jù)被測(cè)試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比，來(lái)計(jì)算被測(cè)組分的含量。 選擇內(nèi)標(biāo)物有4個(gè)要求：1.內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì)；2.它必須完全溶于試樣中，并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；3.加入內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測(cè)組分；4.色譜峰的位置應(yīng)與被測(cè)組分的色譜峰的位置相近，或在幾個(gè)被測(cè)組分色譜峰中間。 內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)是測(cè)定的結(jié)果較為準(zhǔn)確，由于通過(guò)測(cè)量?jī)?nèi)標(biāo)物及被測(cè)組分的峰面積的相對(duì)值來(lái)進(jìn)行計(jì)算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。內(nèi)標(biāo)法的缺點(diǎn)是操作程序較為麻煩，每次分析時(shí)內(nèi)標(biāo)物和試樣都要準(zhǔn)確稱量，有時(shí)尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也有困難。 外標(biāo)法簡(jiǎn)便，但進(jìn)樣量要求十分準(zhǔn)確，要嚴(yán)格控制在與標(biāo)準(zhǔn)物相同的操作條件下進(jìn)行，否則造成分析誤差，得不到準(zhǔn)確的測(cè)量結(jié)果。

內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都是定量的一種方法而已，至于哪一種方法好與不好不能一概而論，做不同的分析，面對(duì)著不同的要求，再加上分析成本分析效率等等問(wèn)題，我想簡(jiǎn)單而有效進(jìn)行定量分析來(lái)滿足要求才是最重要的。

1、以前做過(guò)很多醫(yī)藥、農(nóng)藥中間體的芳香族鹵代化合物的常量定量分析，沒有自動(dòng)進(jìn)樣器，用外標(biāo)法定量，確實(shí)重現(xiàn)性與穩(wěn)定性非常差，結(jié)果經(jīng)常受到搞合成同事的質(zhì)疑。其實(shí)，仔細(xì)分析原因不一定就是外標(biāo)法不適合這種定量分析，首先我們的實(shí)驗(yàn)室儀器和手段是否調(diào)整到一種穩(wěn)定而合理的狀態(tài)了，比如，襯管是否潔凈，玻璃棉的位置是否合適恰當(dāng)（能否使樣品盡可能的汽化）、汽化溫度是否合適、色譜峰形是否對(duì)稱（也就是樣品與色譜柱健合相是否匹配）、附近有沒有其它色譜峰的干擾、選用什么進(jìn)樣方式（如快速進(jìn)樣還是熱針進(jìn)樣）等等因素的影響都需要考慮，如果這些因素都考慮了，按照GMP方法驗(yàn)證對(duì)于精密度的要求，同一樣品進(jìn)6針以上的RSD和配制6個(gè)樣品的定量結(jié)果RSD都能滿足小于1.5%的要求，那么這個(gè)方法用外標(biāo)法就是完全適用的，但是前面的影響因素是一定要都考慮到的，否則談?wù)撨@個(gè)方法是否適用就有失偏頗了。在做過(guò)的許多出口產(chǎn)品的定量分析方法當(dāng)中有許多是一些醫(yī)藥公司提供的比較完善而驗(yàn)證過(guò)的方法，內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都有（他們用的都是自動(dòng)進(jìn)樣）精密度都能滿足RSD小于1.5%的要求，當(dāng)一個(gè)方法能夠滿足測(cè)試要求的時(shí)候，無(wú)論內(nèi)標(biāo)外標(biāo)，都是可行的，當(dāng)然有一個(gè)分析成本和分析時(shí)間的問(wèn)題，內(nèi)標(biāo)的成本和控制溶液、樣品溶液的配制當(dāng)然要比外標(biāo)要高和麻煩一些了。而有些時(shí)候，可能受你實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有儀器和附屬設(shè)備的影響，達(dá)不到一定的要求，而還必須進(jìn)行定量分析，有時(shí)外標(biāo)的結(jié)果可能就要差一些，這時(shí)，你可能就要考慮用內(nèi)標(biāo)法了，可以排除手動(dòng)進(jìn)樣的誤差、分流歧視的影響、包括一些未知因素平行誤差的影響，這時(shí)內(nèi)標(biāo)可能就顯示出它的優(yōu)勢(shì)來(lái)了。

2、上面已經(jīng)提到當(dāng)做方法驗(yàn)證的時(shí)候，當(dāng)同一樣品配制6個(gè)樣品溶液用所選用的外標(biāo)法進(jìn)行定量的時(shí)候，RSD都滿足1.5%的要求時(shí)，也分為兩種情況，小于1%和大于1%小于1.5%。如果RSD的結(jié)果小于1%，那這個(gè)方法就沒有什么可以懷疑的了；如果RSD的結(jié)果大于1%而在1.5%略低一些的范圍活動(dòng)時(shí)，這個(gè)方法的可行性就將受到質(zhì)疑，畢竟這是方法驗(yàn)證，你就要考慮上面1所提到的影響因素的影響了，如果排除掉以上的影響因素，RSD還是在1.5%附近，就要嘗試內(nèi)標(biāo)了，如果內(nèi)標(biāo)結(jié)果的RSD很好，就證明你的這個(gè)方法受實(shí)驗(yàn)條件的影響很大，只能用內(nèi)標(biāo)了，或者干脆將原方法做大的變動(dòng)，再嘗試用外標(biāo)法測(cè)試。

3、而對(duì)于微量分析，比如農(nóng)藥和獸藥殘留的分析、環(huán)境分析等，根據(jù)不同的限量標(biāo)準(zhǔn)要求對(duì)于精密度的要求也比常量分析的要求要寬松的多，RSD有時(shí)可以允許達(dá)到10%甚至更高，這時(shí)可能外標(biāo)法有更大的應(yīng)用空間。

4、單從精密度方面去考慮，排除其它成本和效率的因素，個(gè)人認(rèn)為還是內(nèi)標(biāo)優(yōu)于外標(biāo)。曾經(jīng)做過(guò)一個(gè)中間體二氨基丙醇的常量定量分析，以二乙醇胺為內(nèi)標(biāo)，RTX-5 amine（堿改性） 15m*0.32mm*1.0um色譜柱分析，將配制好的控制溶液（含有內(nèi)標(biāo)物）自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)6針，目的物（二氨基丙醇）與內(nèi)標(biāo)物（二乙醇胺）峰面積比率的RSD為0.18%，而只對(duì)這六針樣品的目的物峰（二氨基丙醇）面積求RSD，結(jié)果為0.71%，通過(guò)這一實(shí)例的結(jié)果大家就會(huì)發(fā)現(xiàn)到底哪個(gè)方法精密度更好了，當(dāng)然是內(nèi)標(biāo)更好了。當(dāng)然這個(gè)化合物的檢測(cè)方法最后根據(jù)上面的驗(yàn)證數(shù)據(jù)用內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)定量都是可以的，實(shí)驗(yàn)室可以自由選擇。但內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)精密度結(jié)果的差異是顯然存在的事實(shí)。

結(jié)論：應(yīng)用外標(biāo)法能夠滿足要求，首選還是外標(biāo)法了，畢竟簡(jiǎn)單而省事。對(duì)于精密度要求比較高、結(jié)果準(zhǔn)確度會(huì)產(chǎn)生重大影響、實(shí)驗(yàn)室條件不是很理想的等等條件下，用內(nèi)標(biāo)法還是必要的。無(wú)論應(yīng)用那種方法，方法的驗(yàn)證和確認(rèn)都是很重要的，只要是按照程序經(jīng)過(guò)驗(yàn)證和確認(rèn)的方法，都有其應(yīng)用的空間的。

外標(biāo)法
用被測(cè)化合物的純品作為標(biāo)準(zhǔn)樣品，配制成一系列的已知濃度的標(biāo)樣。
注入色譜柱的到其響應(yīng)值（峰面積）。
在一定范圍內(nèi)，標(biāo)樣的濃度與響應(yīng)值之間存在較好的線性關(guān)系，即W=f×A，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
在完全相同的實(shí)驗(yàn)條件下，注入未知樣品，得到欲測(cè)組分的響應(yīng)值。
根據(jù)已知的系數(shù)f，即可求出欲測(cè)組分的濃度。

外標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)：
操作、計(jì)算簡(jiǎn)單，是一種常用的定量方法。
無(wú)需各組分都被檢出、洗脫。
需要標(biāo)樣。
標(biāo)樣及未知樣品的測(cè)定條件要一致。
進(jìn)樣體積要準(zhǔn)確。

內(nèi)標(biāo)法操作：
將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入標(biāo)準(zhǔn)樣品，制成混合標(biāo)樣，并配制一系列的已知濃度的工作標(biāo)樣。混合標(biāo)樣中標(biāo)樣與內(nèi)標(biāo)樣的摩爾比不變。
注入色譜柱，以（標(biāo)樣峰面積/內(nèi)標(biāo)樣峰面積）為響應(yīng)值。
根據(jù)響應(yīng)值與工作標(biāo)樣濃度之間存在的線性關(guān)系，即W=f×A，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入未知樣品，注入色譜柱，得到欲測(cè)組分的響應(yīng)值。
根據(jù)已知的系數(shù)f，即可求出欲測(cè)組分的濃度。

內(nèi)標(biāo)法的特點(diǎn)：
操作過(guò)程中樣品和內(nèi)標(biāo)是混合在一起注入色譜柱的，因此只要混合溶液中被測(cè)組分與內(nèi)標(biāo)的量的比值恒定，上樣體積的變化不會(huì)影響影響定量結(jié)果。
內(nèi)標(biāo)法抵消了上樣體積，乃至流動(dòng)相、檢測(cè)器的影響，因此比外標(biāo)法精確。

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9．質(zhì)譜是怎樣做到定量的？

作者：胡墨-知乎

1. 質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度與待分析物含量的關(guān)系
任何定量分析方法都需要建立實(shí)驗(yàn)測(cè)量信號(hào)與待分析物的量的關(guān)系。很幸運(yùn)的是，在質(zhì)譜中，通常也可以建立這樣的關(guān)系，因此質(zhì)譜信號(hào)是可以用于定量的。從題主的說(shuō)明來(lái)看，Ta的疑惑主要在這里。
既然問(wèn)題是“質(zhì)譜是怎樣做到定量的？”，我們不妨把質(zhì)譜信號(hào)的產(chǎn)生按時(shí)間順序粗略分為三個(gè)步驟，即離子的產(chǎn)生，傳輸與檢測(cè)。

• 產(chǎn)生離子時(shí)，不同樣品分子的電離通常是相互獨(dú)立的。因此樣品量越多，其產(chǎn)生的離子也就越多。目前常用的各種離子化方法（EI、ICP、ESI、MALDI等）在實(shí)驗(yàn)中（嚴(yán)格來(lái)說(shuō)僅在一定濃度范圍內(nèi)——術(shù)語(yǔ)是動(dòng)態(tài)范圍，dynamic range）都至少滿足樣品量與產(chǎn)生離子量的正相關(guān)，一般情況下也可以進(jìn)一步近似成線性相關(guān)。

• 傳輸離子時(shí)，簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)可以認(rèn)為傳輸效率與被傳輸離子的量無(wú)關(guān)；（嚴(yán)格地說(shuō)，被傳輸?shù)碾x子太多時(shí)，相同電荷的互相排斥會(huì)造成離子束的“體積”變大，導(dǎo)致傳輸效率下降。這種影響在空間有限的離子阱中表現(xiàn)得更加明顯，因此在離子阱質(zhì)譜中一個(gè)重要的技術(shù)就是適當(dāng)控制進(jìn)入儀器的離子數(shù)量，使其既不太少也不太多。）

• 檢測(cè)離子時(shí)，不論是使用光電倍增管的檢測(cè)器，還是檢測(cè)鏡像電流的檢測(cè)器（ICR/Oribtrap），其信號(hào)強(qiáng)度（在一定范圍內(nèi)）均與離子數(shù)量大致線性相關(guān)。

廢話幾句，可能會(huì)使題主感覺質(zhì)譜不能定量的原因之一是，我們看到的質(zhì)譜圖常用相對(duì)強(qiáng)度作為縱坐標(biāo)，即0-100%最強(qiáng)峰，而不展示信號(hào)的絕對(duì)強(qiáng)度。但在做質(zhì)譜的時(shí)候，儀器記錄的當(dāng)然是絕對(duì)強(qiáng)度（相對(duì)強(qiáng)度也是通過(guò)絕對(duì)強(qiáng)度換算出來(lái)的）。我們需要用絕對(duì)強(qiáng)度來(lái)定量時(shí)，就需要這部分平時(shí)不?？吹男畔⒘?。
另外，在談到色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法時(shí)，待分析物與實(shí)驗(yàn)測(cè)量信號(hào)的關(guān)系之中又多了一層色譜，即待分析物含量->色譜流出物中樣品含量->質(zhì)譜信號(hào)。與EI譜圖分析以相對(duì)強(qiáng)度為主不同，在色譜-質(zhì)譜聯(lián)用時(shí)，信號(hào)的絕對(duì)強(qiáng)度就成了我們天天都要關(guān)心的內(nèi)容，因?yàn)橘|(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度隨時(shí)間的變化就是實(shí)驗(yàn)的色譜圖，通常以總離子強(qiáng)度或者某一特定質(zhì)荷比離子的強(qiáng)度作圖

?2. 定量的兩種方法

說(shuō)過(guò)了為什么質(zhì)譜可以定量，下面我們來(lái)看看具體的定量方法。常用的定量方法有兩種，外標(biāo)法與內(nèi)標(biāo)法。

• 外標(biāo)法

用已知量的標(biāo)準(zhǔn)樣品A和未知量的待測(cè)樣品A分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；我們會(huì)得到以下三個(gè)信息：標(biāo)準(zhǔn)樣品的量（已知）；標(biāo)準(zhǔn)樣品的信號(hào)強(qiáng)度；待測(cè)樣品的信號(hào)強(qiáng)度。（假設(shè)樣品的響應(yīng)=常數(shù)*濃度，從這三個(gè)信息即可算出待測(cè)樣品的量。）
為了更加精確地測(cè)定未知量的樣品，我們希望標(biāo)準(zhǔn)樣品的信號(hào)強(qiáng)度與待測(cè)樣品的信號(hào)強(qiáng)度盡量接近（以減少非線性響應(yīng)的影響）。因此常用的外標(biāo)法會(huì)測(cè)量一系列已知量的標(biāo)準(zhǔn)樣品，繪制一條工作曲線，再用擬合的方法確定未知樣的量。

作者：胡墨? 鏈接：https://www.zhihu.com/question/26510712/answer/34906852

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• 內(nèi)標(biāo)法

外標(biāo)法主要有以下兩方面的局限：1標(biāo)樣和待測(cè)樣是獨(dú)立進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的，實(shí)驗(yàn)間的偶然誤差無(wú)法消除；2標(biāo)樣和待測(cè)樣的基質(zhì)（即除待分析物外的其它成分）不同，基質(zhì)有可能會(huì)帶來(lái)不同的影響，也會(huì)產(chǎn)生誤差。
那么，如果我們把已知量的標(biāo)準(zhǔn)樣品B直接加入待測(cè)樣品A，就可以把標(biāo)準(zhǔn)樣品和未知樣品的測(cè)定在同一次實(shí)驗(yàn)和同樣基質(zhì)中完成，也就消除了兩次實(shí)驗(yàn)和基質(zhì)不同造成的誤差，這就是內(nèi)標(biāo)法。
（如果加入的標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品是同種物質(zhì)A，那么由于它們不可區(qū)分，只通過(guò)一次實(shí)驗(yàn)是不能定量待測(cè)樣的，這時(shí)我們?cè)诩尤霕?biāo)樣前后分別進(jìn)行兩次測(cè)量，即測(cè)量待測(cè)樣及待測(cè)樣+標(biāo)樣的信號(hào)，即可計(jì)算出待測(cè)樣的量。）

3. 質(zhì)譜相關(guān)的特殊定量細(xì)節(jié)

• 同位素稀釋

前面內(nèi)標(biāo)法的介紹中我們可以發(fā)現(xiàn)，最理想的內(nèi)標(biāo)物既要和待測(cè)樣相同（具有相同的響應(yīng)系數(shù)）又要不同（儀器可以區(qū)分二者的信號(hào)），這對(duì)矛盾的集合體就是同位素內(nèi)標(biāo)。
由于不同同位素的化合物具有近似相同的物理化學(xué)性質(zhì)，離子化時(shí)的響應(yīng)通常也是相同的，而它們具有不同的質(zhì)荷比m/z，即可在質(zhì)譜中被區(qū)分出來(lái)。因此同位素標(biāo)準(zhǔn)品是最理想的內(nèi)標(biāo)物。
另外，由于某些元素的天然同位素分布有一定的比例，當(dāng)我們加入一定量的同位素內(nèi)標(biāo)時(shí)，可以把對(duì)信號(hào)絕對(duì)強(qiáng)度的測(cè)量轉(zhuǎn)化為對(duì)信號(hào)相對(duì)比例的測(cè)量，從而提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

在不太復(fù)雜的體系中，我們只要按照分子量就可以定性某種化合物了。但對(duì)于復(fù)雜混合物（如石油產(chǎn)品/生物樣品）而言，很多化合物具有相同或相近的質(zhì)量（同分異構(gòu)體質(zhì)量完全相同，有些化合物分子量非常接近，如CO和N2，要考慮儀器的質(zhì)量分辨率是否能區(qū)分二者），此時(shí)僅靠測(cè)量質(zhì)量就不能確定這個(gè)化合物是否就是我們關(guān)心的“the one”了。

在串聯(lián)質(zhì)譜 (Tandem MS) 儀器中，我們不僅可以把質(zhì)譜儀理解為一個(gè)稱量離子的“天平”，它還具有了離子“鑷子”（選擇某個(gè)特定的離子把它分離出來(lái)）和“剪刀”（把某個(gè)/某些離子激活并打成碎片）的功能。
通過(guò)母離子和子離子的兩步選擇，我們可以在復(fù)雜體系中精確定位到我們關(guān)心的化合物，同時(shí)，兩次離子選擇還可減少?gòu)?fù)雜基質(zhì)的干擾，降低背景噪聲（獲得更低的檢出限）并提高方法的動(dòng)態(tài)范圍。因此選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)是目前色譜（氣相色譜/液相色譜）-質(zhì)譜聯(lián)用中最常用的定量方法。

以生物質(zhì)譜為基礎(chǔ)的蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法主要有Bottom-up和Top-down兩種方法，Top-down（自上而下）技術(shù)可以直接對(duì)完整的蛋白——包括翻譯后修飾蛋白以及其它一些大片段蛋白測(cè)序，而非僅僅針對(duì)多肽；Bottom-up（自下而上）是傳統(tǒng)的手段，它將蛋白質(zhì)的大片段混合物消化/酶解成小片段的肽后再進(jìn)行分析，是在蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中較為廣泛使用的一種質(zhì)譜技術(shù)。

經(jīng)過(guò)多年的努力，研究人員通過(guò)自下而上的方法獲得了上千種細(xì)胞蛋白，這些蛋白在細(xì)胞中發(fā)揮了各式各樣的作用，組成了目前的一些蛋白質(zhì)組學(xué)文庫(kù)。但是由于自下而上的方法主要是消化蛋白，將得到的片段放入質(zhì)譜儀中進(jìn)行分析，然后將這些片段結(jié)果數(shù)據(jù)拼接在一起，因此生成的蛋白質(zhì)草圖都是失焦的混合物，從一片碎片中得到的平均結(jié)果。

而自上而下的方法則不同，這種方法采用的是完整的蛋白，直接進(jìn)行質(zhì)譜分析，捕獲每個(gè)不同的蛋白質(zhì)組形式獨(dú)特的特性。

“分子分析應(yīng)該由自上而下的方法完成，”西北大學(xué)分子生物科學(xué)和化學(xué)教授Neil Kelleher（他從事自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)研究已經(jīng)有二十年了）說(shuō)。Kelleher估計(jì)有20,300個(gè)左右的人類基因組基因具有不同的翻譯或翻譯后修飾差異，構(gòu)成了十億個(gè)蛋白質(zhì)組形式，他說(shuō)，要深入探索這些蛋白的詳細(xì)復(fù)雜性，唯一的方式就是通過(guò)自上而下的方法，解析完整蛋白質(zhì)。

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單純的MS定量效果存在著嚴(yán)重的缺陷，現(xiàn)在的MS定量主要有：

1. 采用GC-MS 技術(shù)對(duì)一類新藥DBT 的研究

2. 采用LC-MS 技術(shù)測(cè)定新藥INN 的人體藥帶動(dòng)力學(xué)

3. 采用ICP/MS 技術(shù)進(jìn)行新藥體藥帶動(dòng)力學(xué)研究

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影響MS定量的主要參數(shù)：

1. Number of Points Across the Chromatographic Peak

2. Spray Stability

3. Peak Shape

4. Chromatography

5. Additives

6. Internal Standard

7. Mass Resolution

下面是一位網(wǎng)上的朋友提供的MS定量分析注意事項(xiàng)：

1 要用目標(biāo)離子的碎片定量，特征性強(qiáng)，排除干擾；

2 在定量分析的方法設(shè)置上，盡可能提高掃描速率，提高準(zhǔn)確率和重復(fù)性（可以通過(guò)a減小掃描質(zhì)量數(shù)的范圍來(lái)提高目標(biāo)峰的掃描次數(shù)，或 將一個(gè)樣品全部分析時(shí)間斷分成n個(gè)segments，對(duì)目標(biāo)離子單獨(dú)設(shè)置掃描模式）；

3 一定要通過(guò)色譜柱分離后定量分析，避免競(jìng)爭(zhēng)性離子的存在影響目標(biāo)離子的離子化效率；如果目標(biāo)分子未與競(jìng)爭(zhēng)性分子完全分開，則在離子化過(guò)程中導(dǎo)致目標(biāo)分子的離子化效率降低，導(dǎo)致樣品分子的定量結(jié)果偏低，當(dāng)然標(biāo)準(zhǔn)濃度的樣品也要用相同的方法分析。

4 如果樣品都是純品的話可以不經(jīng)過(guò)色譜柱直接進(jìn)樣分析，包括做標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品（雖然不建議直接進(jìn)樣分析）。

5 如果用的離子源的噴針位置是可移的話，一定要記住做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)其位置，否則其位置移動(dòng)后在相同的條件下進(jìn)入質(zhì)譜的離子流量會(huì)發(fā)生改變，標(biāo)準(zhǔn)曲線就不能使用了，白忙！

6 所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線一個(gè)月后如果想重復(fù)使用，則用QC樣品檢驗(yàn)一下該標(biāo)準(zhǔn)曲線！

7 對(duì)于已經(jīng)建立好的分析方法在掃描范圍、流動(dòng)相的組成、梯度或流速等方面不要作任何改動(dòng)，否則，標(biāo)準(zhǔn)曲線要重作。

掃描范圍改變目標(biāo)峰的掃描次數(shù)、流動(dòng)相組成改變離子化效率，流速改變色譜峰的保留時(shí)間和峰寬。

8 離子阱的強(qiáng)項(xiàng)在于多級(jí)－定性，四級(jí)桿的強(qiáng)項(xiàng)在于定量；

9 對(duì)于熱穩(wěn)定性不好的樣品可以通過(guò)提高氣速，降低毛細(xì)管溫度的方法保證定量分析的重復(fù)性；一旦方法固定后不要輕易改動(dòng)；

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