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多肽合成中的常見問題解答

2023-07-18 01:23 作者:合肥合生生物  | 我要投稿

如何選擇適合自己研究的多肽純度?


>70% 肽純度肽微陣列 作為制備抗體的抗原層析法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)抗血清滴度>80% 肽純度免疫印跡法(非定量) 酶底物肽(非定量)封閉肽(非定量)親和純化 磷酸化檢測(cè) 蛋白電泳的應(yīng)用和免疫細(xì)胞化學(xué)>95% 肽純度標(biāo)準(zhǔn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和RIA(定量) 受體配體相互作用(定量)體內(nèi)、體外 生物學(xué)測(cè)定 酶的研究和阻斷實(shí)驗(yàn)(定量)NMR研究 質(zhì)譜分析 其他定量檢測(cè)>98% 肽純度SAR研究 臨床試驗(yàn) APIs(藥物活性成分) 工業(yè)品 X-ray晶體研究其他敏感的實(shí)驗(yàn):酶與底物、受體與配體相互作用、阻斷和競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)

多肽的純度與多肽的凈含量
多肽的純度是指HPLC方法在214nm處檢測(cè)到的目標(biāo)多肽的含量(214nm是肽鏈的吸收波長(zhǎng)),紫外分光光度計(jì)檢測(cè)不到水和殘留的鹽份
多肽含量則是指樣品中肽類物質(zhì)相對(duì)于非肽類物質(zhì)所占的百分比。通常一條多肽產(chǎn)品中除了多肽本身還包括生產(chǎn)過程中帶入的非鹽組份,如水,被吸收的溶劑、配位離子和鹽等。
引起多肽的不穩(wěn)定的原因
脫酰胺反應(yīng):在脫酰反應(yīng)中,Asn/Gln 殘基水解形成Asp/Glu。
氧化多肽溶液易氧化的主要原因有兩種,一是溶液中有過氧化物的污染,二是多肽的自發(fā)氧化。在所有的氨基酸殘基中,Met、Cys和His、Trp、Tyr等最易氧化。
水解:多肽中的肽鍵易水解斷裂。由Asp參與形成的肽鍵比其它肽鍵更易斷裂,尤其是Asp-Pro和Asp-Gly 肽鍵。
形成錯(cuò)誤的二硫鍵:二硫鍵之間或二硫鍵與巰基之間發(fā)生交換可形成錯(cuò)誤的二硫鍵,導(dǎo)致三級(jí)結(jié)構(gòu)改變和活性喪失。
旋:除Gly外,所有氨基酸殘基的α碳原子都是手性的,易在堿催化下發(fā)生消旋反應(yīng)。其中Asp殘基最易發(fā)生消旋反應(yīng)。
β-消除:β-消除是指氨基酸殘基中β碳原子上基團(tuán)的消除。Cys、Ser、Thr、Phe、Tyr 等殘基都可通過β-消除降解。在堿性PH下易發(fā)生β-消除,溫度和金屬離子對(duì)其也有影響。
變性、吸附、聚集或沉淀變性一般都與三級(jí)結(jié)構(gòu)以及二級(jí)結(jié)構(gòu)的破壞有關(guān)。在變性狀態(tài),多肽往往更易發(fā)生化學(xué)反應(yīng),活性難以恢復(fù)。在多肽變性過程中,首先形成中間體。通常中間體的溶解度低,易于聚集,形成聚集體,進(jìn)而形成肉眼可見的沉淀。
公司對(duì)合成的多肽提供分裝服務(wù)嗎?
合生生物生物提供部分或全部訂單,免費(fèi)分裝成小份。由于少量分裝可以避免多次反復(fù)凍融,減少容器的開蓋和閉合的次數(shù),減少處理不當(dāng)或細(xì)菌污染的機(jī)會(huì),讓您的多肽更加穩(wěn)定。
多肽應(yīng)該如何保存?
多肽一般是以凍干粉的形式保存,其在-20℃很穩(wěn)定,特別是冷凍干燥后并保存于-20℃干燥器中,大多數(shù)肽在此溫度下可以存放幾年不變。如果一次使用的肽量不多,最好分裝成幾個(gè)小包裝,取用更為方便。
為減少濕度的影響,在將凍干肽暴露于空氣之前,應(yīng)先將其在干燥的條件下恢復(fù)至室溫。當(dāng)無法冷凍干燥時(shí),最好的方法是以較小的樣量存放,并盡快使用。
對(duì)于含Met,Cys或Trp的多肽,脫氧緩沖劑對(duì)其保護(hù)必不可少,因?yàn)檫@種多肽易被空氣氧化,比較好的解決方法是可以在封瓶前,慢慢通入氮?dú)饣驓鍤饬鲝亩档脱趸饔?,沒有條件的建議-80度干燥凍存。
含Gln或Asn的多肽也容易降解,所以相對(duì)于其他不含此類氨基酸的多肽,其保存期較短。
如何對(duì)合成的多肽進(jìn)行質(zhì)檢?

合生生物生物免費(fèi)提供HPLC和MS檢測(cè)結(jié)果。公司所有多肽均采用反相色譜法純化。以質(zhì)譜法測(cè)定肽的分子量來確定產(chǎn)品是否正確,MS檢測(cè)結(jié)果還可顯示大部份的主要雜質(zhì)。如果必要,還可提供肽凈含量檢測(cè),如氨基酸分析或元素分析。這些方法可以證實(shí)多肽的氨基酸組成,他們均可作為多肽確認(rèn)的補(bǔ)充方法。所有交付的肽均達(dá)到了您要求的純度。沒有達(dá)到純度要求的那些多肽均被丟棄。當(dāng)然如果您有需要,也可以發(fā)送給您。
熒光標(biāo)記時(shí),肽和修飾標(biāo)記的染料之間需要加一個(gè)間隔嗎?
多數(shù)染料屬于大分子量芳香族氨基酸,在多肽中引入這一類大型分子,為了避免多肽與標(biāo)簽之間發(fā)生相互作用,維持蛋白的構(gòu)象及其生物學(xué)活性,我們推薦引入一個(gè)可彎曲的間隔區(qū),比如Ahx, Ahx是一個(gè)含有6碳分子的環(huán)狀結(jié)構(gòu),可以維持熒光標(biāo)簽的穩(wěn)定性。否則,F(xiàn)ITC很容易結(jié)合多肽序列中的半胱氨酸殘基或者賴氨酸殘基。
通常情況下,生物素、FITC一類的染料既可以標(biāo)記在蛋白的氨基端也可以標(biāo)記在蛋白的羧基端。然而,為了在最短時(shí)間內(nèi),最便捷又高效地合成多肽,澤溪源推薦客戶選擇標(biāo)記在氨基端。因?yàn)橐粋€(gè)多肽的合成往往是從羧基端開始的,這樣一來,氨基端的修飾便成為最后一個(gè)環(huán)節(jié),不需要再進(jìn)行特別的結(jié)合作用。反之,羧基端修飾需要額外的環(huán)節(jié),因此過程更加復(fù)雜。
為什么要進(jìn)行N端乙?;?,C端酰胺化修飾?
化學(xué)合成的肽往往攜帶游離的氨基和游離的羧基。而肽的序列往往代表了母本蛋白的序列,為了與母本蛋白更為接近,肽末端往往需要封閉,即N端乙?;虲端酰胺化,這些修飾會(huì)減少多肽的總電荷,降低多肽的溶解度,也可以使肽模擬它在母本蛋白中α氨基和羧基的原始狀態(tài)。
如果需要對(duì)N端進(jìn)行乙?;揎椈?qū)端進(jìn)行酰胺化修飾,請(qǐng)?jiān)谙聠螘r(shí)明確。合成一旦結(jié)束,則不能再進(jìn)行修改。
能夠合成的多肽的最大長(zhǎng)度是多少?
我們成功合成了長(zhǎng)度為120個(gè)氨基酸的多肽。 50個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的多肽屬于常規(guī)合成。
更多咨詢,可訪問

synthbio.com


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