細(xì)胞用表達(dá)多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)行轉(zhuǎn)化。

觀察到血管性血友病因子的表達(dá)及對熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白（LDL）的攝入確認(rèn)其內(nèi)皮細(xì)胞特性。

bEnd.3 cells細(xì)胞可用細(xì)胞因子和脂多糖(LPS)誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的Peyer's結(jié)高內(nèi)皮細(xì)胞受體， 粘膜血管定居因子(MAdCAM-1) 及內(nèi)皮細(xì)胞選擇素的表達(dá)。

腫瘤壞死因子 a (TNF alpha), 白介素 1 (IL-1)或 LPS的誘導(dǎo)作用是濃度及時間依賴的。

代數(shù)較早的bEnd.3細(xì)胞未受刺激時在表面表達(dá)MAdCAM-1，但過了30代后就不表達(dá)了。

細(xì)胞粘附分子 1 (ICAM-1)持續(xù)表達(dá)，并在LPS, IL-1 and TNF a處理后升高。

30代前血管細(xì)胞粘附分子 1 (VCAM-1)持續(xù)表達(dá)，但30代后不表達(dá)。

bEnd.3細(xì)胞中腫瘤壞死因子a (TNF alpha)可以誘導(dǎo)P-選擇素的表達(dá)，30代后更強。

Bend.3細(xì)胞信息

細(xì)胞名稱：小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

細(xì)胞簡稱：Bend.3

細(xì)胞別名：bEND.3; b.End3; Bend.3; bEnd3; BEND3; brain-derived Endothelial cells.3產(chǎn)品貨號：TCM-C715

種屬來源：小鼠

組織來源：腦

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣細(xì)胞　

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%P/S

配套培養(yǎng)基貨號：TCM-G715

傳代比例：1:4-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：24-32 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存

推薦海星?HyCyte?一步凍存液（即用型、無血清、無需程序降溫），貨號：GUCP-201

Bend.3細(xì)胞培養(yǎng)要點

bEnd.3細(xì)胞最常遇到的問題就是細(xì)胞形態(tài)變化和難消化

• 細(xì)胞形態(tài)問題

Bend.3細(xì)胞本身生長較慢，在低密度時會呈現(xiàn)不規(guī)則細(xì)胞形態(tài)，高密度時則呈規(guī)則纖維狀，所以若在培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)異常，則有可能是細(xì)胞密度低，建議細(xì)胞鋪滿密度較高時傳代。

1. 消化時間：bEnd.3細(xì)胞培養(yǎng)時間越長越難消化，培養(yǎng)4天傳代，一般消化3-5分鐘；培養(yǎng)7天傳代，一般消化5-10分鐘。具體消化時間以顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)為準(zhǔn)。

2. 難消化問題：如遇到消化困難不必?fù)?dān)心，可通過分次消化的方式解決，具體操作方法如下（以T25瓶細(xì)胞為例）：

(1) 吸出原培養(yǎng)液；

(2) 加入2mL左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞，吸出PBS丟棄；

(3) 加入1mL左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞；

(4) 放入培養(yǎng)箱消化，消化3-5分鐘（根據(jù)具體細(xì)胞稍作延長或縮短），顯微鏡下看到細(xì)胞開始漂浮，可以加入2mLPBS，晃動培養(yǎng)瓶使細(xì)胞懸浮，不要吹打剩下的貼壁細(xì)胞；

(5) 吸出培養(yǎng)瓶內(nèi)的PBS和細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)移到無菌離心管中，在離心管中加入3mL含血清的培養(yǎng)基終止消化并吹散細(xì)胞，使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液；

(6) 原培養(yǎng)瓶中加入0.5mL胰酶，晃動培養(yǎng)瓶浸潤細(xì)胞，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)消化，直到細(xì)胞塊中間全部收縮變圓，晃動培養(yǎng)瓶可脫落；

(7) 用3mL含血清的培養(yǎng)基終止消化，將瓶底的細(xì)胞全部吹下，并輕輕吹吸分散細(xì)胞呈單顆；

(8) 收集細(xì)胞懸液與第一次消化下來的細(xì)胞合并到一個離心管；

(9) 離心收集細(xì)胞沉淀，1100rpm/min 4分鐘，離心完吸出上清丟棄；

(10) 加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細(xì)胞，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補足培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)；

(11) 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤。Bend.3細(xì)胞培養(yǎng)注意事項

(1) 細(xì)胞培養(yǎng)過程中形態(tài)多樣，低密度時容易出現(xiàn)放射狀細(xì)胞，看似已經(jīng)鋪滿瓶底，其實細(xì)胞量較少，需要細(xì)胞胞體排列緊密的時候進(jìn)行傳代；(2) 細(xì)胞培養(yǎng)過程中避免頻繁換液，可以每隔2-3天換液或者半量換液一次；(3) 培養(yǎng)過程中會產(chǎn)生10%左右活的單顆漂浮細(xì)胞，貼壁細(xì)胞密度偏低時，注意收集懸浮細(xì)胞，貼壁細(xì)胞密度偏高時，可以換液時丟棄；(4) 接種量對細(xì)胞生長有影響，接種量過低細(xì)胞會有增殖緩慢，漂浮過多的現(xiàn)象，請注意控制傳代比例；(5) 細(xì)胞對溫度和pH較敏感，傳代或換液前培養(yǎng)基可以常溫復(fù)溫4小時以上；避免使用pH改變（偏酸：顏色偏黃；偏堿：顏色偏紫紅）的培養(yǎng)基；

(6) 細(xì)胞傳代過程中若出現(xiàn)單次消化時間過長，可進(jìn)行分次消化，切不可將細(xì)胞強行吹下來，以避免吹打造成細(xì)胞機械損傷。

以上內(nèi)容由海星生物提供 （hycyte.com）

我們的服務(wù)：CRISPR/Cas9細(xì)胞基因編輯、載體構(gòu)建/病毒包裝、分子診斷標(biāo)準(zhǔn)品/突變基因標(biāo)準(zhǔn)品/融合基因標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)/細(xì)胞干擾

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