實驗中很多情況下我們都要用到穩(wěn)定細胞系，但質粒建系時間長，成功率低，很多時候耗時半年還不見成效，眼看別人實驗都收尾了，自己這邊卻還沒有動靜，耗在上面的時間精力足夠寫一篇血淚史！

但是現(xiàn)在不用擔心！

今天我們就來聊一聊，要穩(wěn)定建系并且更好！

穩(wěn)定轉染，即進入細胞的質粒整合入細胞基因組中，并能隨細胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。這是相對瞬時轉染而言的。

瞬時轉染的表達，外源基因導入整合基因組的幾率非常低，絕大部分以游離形式存在，，導致最后拷貝數(shù)被稀釋，無法達到持續(xù)表達外源基因的目的。一般用轉染試劑進行質粒轉染，多為瞬時轉染。

那么在什么情況下我們需要構建穩(wěn)定株呢？

1、一般如下情況需要構建穩(wěn)定株

• 長期在目的細胞中研究，通過構建穩(wěn)定株，可以大大或者病毒，也極大方便實驗研究；

• 部分蛋白半衰期極長，瞬時RNA只能干擾表達，無法去除已經(jīng)表達的目的蛋白，通過構建穩(wěn)定株可以實現(xiàn)更好的

• 瞬轉往往會引入極高拷貝數(shù)的表達，導致因為人為因素造成實驗結果的不精確，構建穩(wěn)定株可以幫助進行實驗研究；

• 需要用誘導表達系統(tǒng)的，主要是一些致死基因或者是需要時空表達的；

• 需要用細胞的，比如裸鼠成瘤等，往往需要構建成穩(wěn)轉株

2、構建穩(wěn)定株的方法

其實用脂質體轉染、磷酸鈣轉染法等理論上是可以構建穩(wěn)定株的，但這些方法整合入基因組的效率極低，很難成功。而可以攜帶外源基因隨機整合進基因組，效率很高，是建立穩(wěn)定株的最優(yōu)方式。

3、構建穩(wěn)定株的注意點

穩(wěn)定株構建是個長期過程，從質粒構建到慢病毒包裝，再到細胞感染及后期的篩選，每一步都至關重要，所以建立穩(wěn)轉株花個半年時間，也是常有的事，而且要承擔病毒包裝不成功，細胞感染效率低等風險。

所以，想要短期內高效構建出穩(wěn)定細胞株，就不要錯過漢恒提供的“三嚴”穩(wěn)轉株構建服務：

l?種子優(yōu)良-- 嚴 選低代數(shù)細胞來源，無支原體無黑膠蟲；

漢恒生物所有的細胞均從中科院細胞庫購買，代數(shù)低無污染，可提供STR檢測報告

l?性狀穩(wěn)定-- 嚴 酷的篩選及靶基因表達驗證體系；

漢恒生物所有的穩(wěn)轉株都采用RT-qPCR驗證，保證表達水平

l?活力無損-- 嚴 格的建系后連續(xù)3代細胞增殖活力評價