實驗室殺手們，先別著急處理細胞，花5分鐘仔細閱讀~

1、對于復蘇細胞

① 請按照說明書提前準備好基礎培養(yǎng)基、血清、因子、胰酶、雙抗，不要隨意更改培養(yǎng)條件，提前將生物安全柜進行酒精消毒和紫外滅菌。

② 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液、培養(yǎng)基渾濁或污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

③ 細胞在37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3小時，在倒置顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，給細胞（100倍×2張，200倍×2張）以及培養(yǎng)瓶（外觀×1張）拍照留存，售后時肯定需要提供。

④ 瓶內充液培養(yǎng)基（運輸培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，需按照說明書上的培養(yǎng)條件配制新鮮完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞。

⑤ 鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，收集全部充液培養(yǎng)基，250g離心5分鐘，棄去培養(yǎng)瓶中充液培養(yǎng)基，用新鮮配制的完全培養(yǎng)基重懸未貼壁的細胞，將細胞鋪瓶至新的T25細胞培養(yǎng)瓶，補齊完全培養(yǎng)基至6mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，立刻對細胞進行傳代處理。

注：在快遞運送過程中細胞因振動會造成脫落現(xiàn)象，不論繼續(xù)培養(yǎng)還是傳代，未貼壁的細胞均需離心回收。

⑥ 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ，保種1支，另外1支傳代至T25新瓶，前3代建議均采用1:2傳代，若細胞明顯達到對數(shù)期，1:2傳代后第二天就長滿，則可提高傳代比例，采用1:3傳代，前面代次建議代代保種，以妨出現(xiàn)問題后無種可用。

⑦ 由于細胞在運輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時間顛簸，收到細胞進行傳代后，建議前3-5代培養(yǎng)條件可適當提高血清含量以促進恢復細胞原有狀態(tài)并縮短到達對數(shù)期的時間。

⑧ 市面上血清魚龍混雜，假血清（BSA或替代物冒充血清）、劣質血清（小牛冒充胎牛）、水貨（國產冒充進口）屢見不鮮，若客戶培養(yǎng)細胞過程中明顯感覺細胞生長速度不及預期，且無法更換血清，建議酌情提高血清含量來彌補血清質量的缺陷，以期提高細胞生長速度。

⑨實驗結束后，將臺子內的細胞放回培養(yǎng)箱，試劑放回冰箱，最后噴灑Deeming實驗室安全衛(wèi)士，預防微生物污染，關閉生物安全柜，打開紫外滅菌30分鐘以上。

特別提醒：

1.復蘇的細胞千萬千萬別放冰箱，冷凍冷藏都不可以，這是活細胞，不是試劑，切記?。?！

2.由于大部分的細胞系比較容易培養(yǎng)，以致于”問題血清“不能被及時發(fā)覺，但部分細胞對于血清品質有嚴格要求，用“問題血清“培養(yǎng)細胞極易造成細胞脫落、死亡，務必要擦亮眼睛，選擇靠譜的血清供應商。

2、對于凍存細胞

① 收到快遞后，若發(fā)現(xiàn)凍存管破損、箱內已無干冰，請拍照后及時聯(lián)系供貨商。

② 收到細胞后請盡快復蘇，給凍存管（外觀×1張）拍照留存，隔天在倒置顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，給細胞（100倍×2張，200倍×2張）拍照，售后時需提供。

③ 復蘇細胞時不可直接將凍存管丟進水浴鍋，用鑷子夾住凍存管頂部，將凍存管下部浸入水中即可，由于水浴鍋處于實驗室暴露、高溫、濕潤環(huán)境，極易滋生各種微生物，建議在水浴鍋中加入Deeming水浴鍋安全衛(wèi)士抑制各類微生物的滋生，最大程度上防止水浴鍋中的微生物對凍存細胞造成的污染。

④ 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作，凍存管、試劑、耗材拿進去之前一定要用75%酒精消毒，培養(yǎng)試劑盡量不要共用，若有共用試劑，建議配成完培后整體過濾除菌。

⑤ 原代細胞傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ，保種1支，另外1支傳代至T25新瓶，前面代次建議代代保種，以妨出現(xiàn)問題后無種可用，原代細胞需根據(jù)生長狀況判斷傳代比例。

⑥ 第一次傳代時需要摸索消化時間，建議每隔30s就觀察一次，并記錄消化時間，細胞會隨著后期傳代次數(shù)的增多而延長消化時間。

⑦ 由于細胞在運輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時間顛簸，收到細胞進行復蘇后，前1-2代培養(yǎng)可適當提高血清含量以促進恢復細胞原有狀態(tài)并縮短到達對數(shù)期的時間。

⑧ 原代細胞建議選用廠家供應的專用培養(yǎng)基，否則可能會因為改變培養(yǎng)條件，大大縮短細胞的培養(yǎng)代數(shù)，造成種子細胞的浪費。

⑨ 及時更換和補充培養(yǎng)箱水盤內的水，建議加入Deeming細胞培養(yǎng)箱水盤安全衛(wèi)士進行污染物的預防。

⑩ 購買的細胞只可用于科研，不得應用于人體（之前有寶子買MSC想用來喝或者回輸，據(jù)說看了營銷號說可以強身健體，這個絕對不可以昂，應用人體的細胞屬于藥物，需要進行人體使用的臨床驗證，請大家一定理性看待，勿信傳言）。